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额敏的雪

金虫 (著名写手)

[求助] PCR后跑胶没有任何条带 已有17人参与

自己设计了10对引物,跑胶没有任何条带,10对引物都没有出条带,可能原因是什么?是不是说明引物设计的不好?
因为,1.同样的cDNA,用别人的引物(同一植物的其他基因引物)就有条带。2.做了温度梯度PCR,每个温度梯度都没有条带,3 用引物直接跑胶,引物有条带,说明引物存在(我担心稀释的时候引物不小心散出来),4 ,请问还能做些什么来找出问题产生的原因
可是设计引物的时候什么二聚体,错配,跨内含子的网上书上找到的哪些能注意的我都注意了,为什么没有条带,请问引物设计还要注意什么?
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mjt2007

铁杆木虫 (职业作家)

引用回帖:
4楼: Originally posted by 额敏的雪 at 2014-01-16 20:31:24
交叉?就是把不同基因的引物混一起pcr?
...

从10对引物中随意挑出1个上游引物和1个下游引物组成一对引物。

» 本帖已获得的红花(最新10朵)

Theworldisnotinyourbooksandmaps,itisoutthere.
6楼2014-01-16 20:58:52
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lvbobo823

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
gyesang: 金币+1, 鼓励交流! 2014-01-16 21:28:45
是不是你参考的基因在里面没有表达。再一个看看你的引物在基因的位置不要在内含子上。
hehe
2楼2014-01-16 20:22:01
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mjt2007

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励交流! 2014-01-16 21:28:54
1.不一定是引物的问题,换个Taq酶试一试;
2. 如果10对引物退火温度合适,交叉使用试一下。
好运!
Theworldisnotinyourbooksandmaps,itisoutthere.
3楼2014-01-16 20:26:51
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额敏的雪

金虫 (著名写手)

引用回帖:
3楼: Originally posted by mjt2007 at 2014-01-16 20:26:51
1.不一定是引物的问题,换个Taq酶试一试;
2. 如果10对引物退火温度合适,交叉使用试一下。
好运!

交叉?就是把不同基因的引物混一起pcr?

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
4楼2014-01-16 20:31:24
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