应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

Znn3bq.jpeg
小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 关于双酶切的酶的失活问题
北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
71/1返回列表
查看: 5570  |  回复: 6
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

kongzhen1985

新虫 (初入文坛)

[交流] 关于双酶切的酶的失活问题 已有4人参与

最近实验要用到EcoRI和KpnI进行双酶切，且酶切以后需要进行后续的连接反应，EcoRI可以采用热失活灭活，但是KpnI在网上搜索发现不能热失活，想问下有做过这方面的能帮分析下吗？谢谢啦!!还有这两个酶进行双酶切过夜可以吗？
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2013-12-23 22:42:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)
★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
gyesang: 金币+2, 鼓励交流！ 2013-12-24 00:22:41
通常做完酶切最好回收纯化后再做连接。KpnI可以通过纯化回收步骤失活。虽然各个公司的酶稍有不同，公司的说明书上会有这方面的信息。据我的经验，这两个酶通常是可以切过夜的。
赞一下 回复此楼
2楼2013-12-23 23:36:25
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

luwei13566

木虫 (正式写手)
★ ★ ★
kx444555: 金币+3, 鼓励交流 2013-12-24 08:24:15
双酶切后可以跑胶后割胶回收的方法进行纯化，回收后所有的酶全部除去~~，如果想过夜双酶切首先要看看两个酶的说明书确定两个酶的酶切buffer是否兼容，用不太兼容的buffer长时间酶切可能会诱发star活性~~，
赞一下 回复此楼
大家相互帮助哈
3楼2013-12-24 00:30:13
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

sxxuan

金虫 (著名写手)
★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
gyesang: 金币+2, 鼓励交流！ 2013-12-24 12:10:04
很少主动地灭活酶
一来是纯化的时候可以去除，二来如果割胶的话加入电泳buffer也可以把酶失活的
赞一下 回复此楼
你的日子如何，你的力量也必如何！
4楼2013-12-24 09:26:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

kongzhen1985

新虫 (初入文坛)
因为我是要做重组酶方面的。说明书上是酶切完后直接热失活就可以用于重组反应，所以担心纯化后会损失一部分的，如果是这样那我还是回收一下吧，怕影响后续的重组反应，谢谢大家的帮忙了。还有有做重组方面的虫友能交流下吗？
赞一下 回复此楼
5楼2013-12-24 09:52:12
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lillian菲

银虫 (小有名气)
★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
kx444555: 金币+3, 鼓励交流 2013-12-25 12:19:48
做完酶切必须要纯化一下，因为酶切会引入一些离子，影响下面实验，且纯化一下可以让酶失活，不用热失活，这不是一举两得嘛。纯化虽然会损失一部分，但对下面实验还是有利的，否则你的实验后面出现问题你都不知道咋回事。还是每一步都做好最好了，这样不会出现问题。
还有酶切最好不要过夜切，大概一两个小时就可以了。你用的酶我都用过，很好用，推荐你用fermentas公司的，酶都很好用，又便宜。
赞一下 回复此楼
6楼2013-12-24 10:05:17
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

kongzhen1985

新虫 (初入文坛)
恩，谢谢大家提的意见，我还是回收一下吧
赞一下 回复此楼
7楼2013-12-24 12:11:48
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 kongzhen1985 的主题更新
71/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 324求调剂 +16 想上学求调 2026-04-03 16/800 2026-04-08 16:07 by luoyongfeng
[考研] 266求调剂 +4 08电气工程 2026-04-03 4/200 2026-04-08 15:57 by 向9755
[考研] 274求调剂求调剂 +10 Jachenbingoo 2026-04-06 13/650 2026-04-08 14:25 by zhq0425
[考博] 申博 +8 IQwQl 2026-04-04 8/400 2026-04-08 09:43 by 0608104024
[考研] 计算机408｜在校多次国家级竞赛获奖｜申请调剂 +4 东山大白鹅 2026-04-05 4/200 2026-04-08 00:18 by chongya
[考研] 313求调剂 +3 十六拾陆 2026-04-07 3/150 2026-04-07 23:20 by lbsjt
[考研] 306求调剂 +3 15287505595 2026-04-03 3/150 2026-04-07 18:08 by 蓝云思雨
[考研] 材料与化工371求调剂 +14 陪琳看海 2026-04-04 15/750 2026-04-06 06:59 by houyaoxu
[考研] 262求调剂 +7 天下第一文 2026-04-04 8/400 2026-04-05 21:31 by 激流勇渡
[考研] 327求调剂 +4 拾光任染 2026-04-05 4/200 2026-04-05 20:16 by 南航~万老师
[考研] 284求调剂 +7 徐同学_001 2026-04-04 13/650 2026-04-05 17:19 by yulian1987
[考研] 083200 333求调剂 +3 十二！！ 2026-04-04 3/150 2026-04-05 08:28 by barlinike
[考研] 求调剂 +4 晟功? 2026-04-03 4/200 2026-04-04 21:58 by hemengdong
[考研] 292求调剂 +11 2022080213 2026-04-04 13/650 2026-04-04 18:38 by macy2011
[考研] 一志愿沪985，326分求调剂 +3 刘墨墨 2026-04-03 3/150 2026-04-04 11:16 by 悲伤的芋头
[考研] 求调剂，一志愿南京航空航天大学 ，080500材料科学与工程学硕 +10 @taotao 2026-04-03 10/500 2026-04-04 09:01 by T可可西里T
[考研] 285求调剂 +5 AZMK 2026-04-03 8/400 2026-04-03 18:17 by AZMK
[考研] 279求调剂 +6 qazplm0852 2026-04-02 6/300 2026-04-03 10:03 by 蓝云思雨
[考研] 材料考研调剂 +10 Gs大王 2026-04-02 10/500 2026-04-03 09:47 by 遗忘消失的灆
[考研] 348环境工程调剂 +3 吴彦祖24k 2026-04-01 3/150 2026-04-02 09:14 by nanaliuyun
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭