24小时热门版块排行榜    

查看: 5508  |  回复: 6
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

kongzhen1985

新虫 (初入文坛)

[交流] 关于双酶切的酶的失活问题 已有4人参与

最近实验要用到EcoRI和KpnI进行双酶切,且酶切以后需要进行后续的连接反应,EcoRI可以采用热失活灭活,但是KpnI在网上搜索发现不能热失活,想问下有做过这方面的能帮分析下吗?谢谢啦!!还有这两个酶进行双酶切过夜可以吗?
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

luwei13566

木虫 (正式写手)

★ ★ ★
kx444555: 金币+3, 鼓励交流 2013-12-24 08:24:15
双酶切后可以跑胶后割胶回收的方法进行纯化,回收后所有的酶全部除去~~,如果想过夜双酶切首先要看看两个酶的说明书确定两个酶的酶切buffer是否兼容,用不太兼容的buffer长时间酶切可能会诱发star活性~~,
大家相互帮助哈
3楼2013-12-24 00:30:13
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 7 个回答

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
gyesang: 金币+2, 鼓励交流! 2013-12-24 00:22:41
通常做完酶切最好回收纯化后再做连接。KpnI可以通过纯化回收步骤失活。虽然各个公司的酶稍有不同,公司的说明书上会有这方面的信息。据我的经验,这两个酶通常是可以切过夜的。
2楼2013-12-23 23:36:25
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

sxxuan

金虫 (著名写手)

★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
gyesang: 金币+2, 鼓励交流! 2013-12-24 12:10:04
很少主动地灭活酶
一来是纯化的时候可以去除,二来如果割胶的话加入电泳buffer也可以把酶失活的
你的日子如何,你的力量也必如何!
4楼2013-12-24 09:26:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

kongzhen1985

新虫 (初入文坛)

因为我是要做重组酶方面的。说明书上是酶切完后直接热失活就可以用于重组反应,所以担心纯化后会损失一部分的,如果是这样那我还是回收一下吧,怕影响后续的重组反应,谢谢大家的帮忙了。还有有做重组方面的虫友能交流下吗?
5楼2013-12-24 09:52:12
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 材料专硕326求调剂 +5 墨煜姒莘 2026-03-15 5/250 2026-03-16 21:30 by 木瓜膏
[考研] 东南大学364求调剂 +5 JasonYuiui 2026-03-15 5/250 2026-03-16 21:28 by 木瓜膏
[考研] 085601求调剂 +3 Du.11 2026-03-16 3/150 2026-03-16 20:42 by 无际的草原
[考研] 318求调剂 +3 Yanyali 2026-03-15 3/150 2026-03-16 16:41 by houyaoxu
[考研] 321求调剂 +5 大米饭! 2026-03-15 5/250 2026-03-16 16:33 by houyaoxu
[考研] 308求调剂 +3 是Lupa啊 2026-03-16 3/150 2026-03-16 10:07 by 求调剂zz
[考研] 326求调剂 +4 上岸的小葡 2026-03-15 5/250 2026-03-16 08:39 by Linda Hu
[考研] 080500,材料学硕302分求调剂学校 +4 初识可乐 2026-03-14 5/250 2026-03-14 21:08 by peike
[考研] 材料工程327求调剂 +3 xiaohe12w 2026-03-11 3/150 2026-03-14 20:20 by ms629
[考研] 266求调剂 +4 学员97LZgn 2026-03-13 4/200 2026-03-14 08:37 by zhukairuo
[考研] 材料工程专硕,一志愿中国矿业大学,总分314,求调剂 +5 无懈可击的巨人 2026-03-10 5/250 2026-03-14 00:37 by JourneyLucky
[考研] 279求调剂 +3 Dizzy123@ 2026-03-10 3/150 2026-03-13 23:02 by JourneyLucky
[考研] 一志愿中科院,化学方向,295求调剂 +4 一氧二氮 2026-03-11 4/200 2026-03-13 22:35 by JourneyLucky
[考研] 求材料调剂 +5 隔壁陈先生 2026-03-12 5/250 2026-03-13 22:03 by 星空星月
[考研] 329求调剂 +3 miaodesi 2026-03-12 4/200 2026-03-13 20:53 by 18595523086
[硕博家园] 085600 260分求调剂 +3 天空还下雨么 2026-03-13 5/250 2026-03-13 18:46 by 天空还下雨么
[考研] 材料专硕350 求调剂 +4 王金科 2026-03-12 4/200 2026-03-13 16:02 by ruiyingmiao
[考研] 工科278分求调剂 +5 周慢热啊 2026-03-12 7/350 2026-03-13 15:49 by JourneyLucky
[考研] 0817化学工程与技术考研312分调剂 +3 T123 tt 2026-03-12 3/150 2026-03-13 10:49 by houyaoxu
[考研] 0703化学调剂 +3 三dd. 2026-03-10 3/150 2026-03-10 15:45 by peike
信息提示
请填处理意见