应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 关于双酶切的酶的失活问题
51/1返回列表
查看: 5369  |  回复: 6
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

kongzhen1985

新虫 (初入文坛)

[交流] 关于双酶切的酶的失活问题 已有4人参与

最近实验要用到EcoRI和KpnI进行双酶切，且酶切以后需要进行后续的连接反应，EcoRI可以采用热失活灭活，但是KpnI在网上搜索发现不能热失活，想问下有做过这方面的能帮分析下吗？谢谢啦!!还有这两个酶进行双酶切过夜可以吗？
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2013-12-23 22:42:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

luwei13566

木虫 (正式写手)
★ ★ ★
kx444555: 金币+3, 鼓励交流 2013-12-24 08:24:15
双酶切后可以跑胶后割胶回收的方法进行纯化，回收后所有的酶全部除去~~，如果想过夜双酶切首先要看看两个酶的说明书确定两个酶的酶切buffer是否兼容，用不太兼容的buffer长时间酶切可能会诱发star活性~~，
赞一下 回复此楼
大家相互帮助哈
3楼2013-12-24 00:30:13
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 7 个回答

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)
★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
gyesang: 金币+2, 鼓励交流！ 2013-12-24 00:22:41
通常做完酶切最好回收纯化后再做连接。KpnI可以通过纯化回收步骤失活。虽然各个公司的酶稍有不同，公司的说明书上会有这方面的信息。据我的经验，这两个酶通常是可以切过夜的。
赞一下 回复此楼
2楼2013-12-23 23:36:25
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

sxxuan

金虫 (著名写手)
★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
gyesang: 金币+2, 鼓励交流！ 2013-12-24 12:10:04
很少主动地灭活酶
一来是纯化的时候可以去除，二来如果割胶的话加入电泳buffer也可以把酶失活的
赞一下 回复此楼
你的日子如何，你的力量也必如何！
4楼2013-12-24 09:26:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

kongzhen1985

新虫 (初入文坛)
因为我是要做重组酶方面的。说明书上是酶切完后直接热失活就可以用于重组反应，所以担心纯化后会损失一部分的，如果是这样那我还是回收一下吧，怕影响后续的重组反应，谢谢大家的帮忙了。还有有做重组方面的虫友能交流下吗？
赞一下 回复此楼
5楼2013-12-24 09:52:12
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 7 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭