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kongzhen1985

新虫 (初入文坛)

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[交流] 关于双酶切的酶的失活问题已有4人参与

最近实验要用到EcoRI和KpnI进行双酶切，且酶切以后需要进行后续的连接反应，EcoRI可以采用热失活灭活，但是KpnI在网上搜索发现不能热失活，想问下有做过这方面的能帮分析下吗？谢谢啦!!还有这两个酶进行双酶切过夜可以吗？

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1楼 2013-12-23 22:42:03

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lillian菲

银虫 (小有名气)

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小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
kx444555: 金币+3, 鼓励交流 2013-12-25 12:19:48

做完酶切必须要纯化一下，因为酶切会引入一些离子，影响下面实验，且纯化一下可以让酶失活，不用热失活，这不是一举两得嘛。纯化虽然会损失一部分，但对下面实验还是有利的，否则你的实验后面出现问题你都不知道咋回事。还是每一步都做好最好了，这样不会出现问题。
还有酶切最好不要过夜切，大概一两个小时就可以了。你用的酶我都用过，很好用，推荐你用fermentas公司的，酶都很好用，又便宜。

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