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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 如何将质粒转入酿酒酵母啊
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siyecaodewo

银虫 (小有名气)

[求助] 如何将质粒转入酿酒酵母啊 已有4人参与

目前用的是电转，5ul质粒转，电转后用山梨醇，可是转不成功，求助求助
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1楼 2013-12-17 15:11:43
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lpzl

木虫 (正式写手)
引用回帖:
6楼: Originally posted by luwei13566 at 2013-12-26 22:11:49
我一般用1mlYPDS，应该没问题吧，顺便求教一下，电转化后加1M山梨醇的作用是复苏吗？为什么要用1M山梨醇复苏。。...

加山梨醇的作用：增加细胞膜的通透性。在毕赤酵母表达系统中，加入山梨醇还具有碳源的作用
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7楼2013-12-27 08:44:05
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lpzl

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，分子生物期待你更多精彩。 2013-12-18 17:32:20
siyecaodewo: 金币+2, ★有帮助, 电转似乎还是不行，选择酿酒酵母一档，电转经常会吱的一声，查看电转时间几乎为0，选择1.5kv时，时间还多一点，但是把筛选平板上的菌提质粒却没有。今年打算用化转试试。谢谢你哦 2014-02-20 11:51:43
电转化，电转后直接用YPD培养。
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2楼2013-12-17 16:17:25
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siyecaodewo

银虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by lpzl at 2013-12-17 16:17:25
电转化，电转后直接用YPD培养。

长了一点点，很小，现在都没怎么长大了，怕只是在ypd上长了的，不能再选择培养基上长，过几天pcr下跑个胶试试，觉得希望不大啊。不知道化学法会不会好些
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3楼2013-12-26 13:29:02
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lpzl

木虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by siyecaodewo at 2013-12-26 13:29:02
长了一点点，很小，现在都没怎么长大了，怕只是在ypd上长了的，不能再选择培养基上长，过几天pcr下跑个胶试试，觉得希望不大啊。不知道化学法会不会好些...

电转后，立即向电极杯中加入1ml YPD于30度复苏1小时，然后再涂平板。。。
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4楼2013-12-26 18:30:14
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