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siyecaodewo

银虫 (小有名气)

[求助] 如何将质粒转入酿酒酵母啊 已有4人参与

目前用的是电转,5ul质粒转,电转后用山梨醇,可是转不成功,求助求助
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lpzl

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香,分子生物期待你更多精彩。 2013-12-18 17:32:20
siyecaodewo: 金币+2, 有帮助, 电转似乎还是不行,选择酿酒酵母一档,电转经常会吱的一声,查看电转时间几乎为0,选择1.5kv时,时间还多一点,但是把筛选平板上的菌提质粒却没有。今年打算用化转试试。谢谢你哦 2014-02-20 11:51:43
电转化,电转后直接用YPD培养。
Start_everyday_with_a_new_hope,_leave_bad_memories...
2楼2013-12-17 16:17:25
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siyecaodewo

银虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by lpzl at 2013-12-17 16:17:25
电转化,电转后直接用YPD培养。

长了一点点,很小,现在都没怎么长大了,怕只是在ypd上长了的,不能再选择培养基上长,过几天pcr下跑个胶试试,觉得希望不大啊。不知道化学法会不会好些
3楼2013-12-26 13:29:02
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lpzl

木虫 (正式写手)

引用回帖:
3楼: Originally posted by siyecaodewo at 2013-12-26 13:29:02
长了一点点,很小,现在都没怎么长大了,怕只是在ypd上长了的,不能再选择培养基上长,过几天pcr下跑个胶试试,觉得希望不大啊。不知道化学法会不会好些...

电转后,立即向电极杯中加入1ml YPD于30度复苏1小时,然后再涂平板。。。
Start_everyday_with_a_new_hope,_leave_bad_memories...
4楼2013-12-26 18:30:14
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三蛰

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2013-12-27 09:40:58
其实觉得醋酸锂转化也不错,就是繁琐了点,效果还是可以的。
我不会!
5楼2013-12-26 20:05:47
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luwei13566

木虫 (正式写手)

引用回帖:
4楼: Originally posted by lpzl at 2013-12-26 18:30:14
电转后,立即向电极杯中加入1ml YPD于30度复苏1小时,然后再涂平板。。。...

我一般用1mlYPDS,应该没问题吧,顺便求教一下,电转化后加1M山梨醇的作用是复苏吗?为什么要用1M山梨醇复苏。。
大家相互帮助哈
6楼2013-12-26 22:11:49
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lpzl

木虫 (正式写手)

引用回帖:
6楼: Originally posted by luwei13566 at 2013-12-26 22:11:49
我一般用1mlYPDS,应该没问题吧,顺便求教一下,电转化后加1M山梨醇的作用是复苏吗?为什么要用1M山梨醇复苏。。...

加山梨醇的作用:增加细胞膜的通透性。在毕赤酵母表达系统中,加入山梨醇还具有碳源的作用
Start_everyday_with_a_new_hope,_leave_bad_memories...
7楼2013-12-27 08:44:05
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luwei13566

木虫 (正式写手)

引用回帖:
7楼: Originally posted by lpzl at 2013-12-27 08:44:05
加山梨醇的作用:增加细胞膜的通透性。在毕赤酵母表达系统中,加入山梨醇还具有碳源的作用...

论复苏效果山梨醇应该没有YPD好吧。~
大家相互帮助哈
8楼2013-12-27 09:40:15
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lpzl

木虫 (正式写手)

引用回帖:
8楼: Originally posted by luwei13566 at 2013-12-27 09:40:15
论复苏效果山梨醇应该没有YPD好吧。~...

我个人觉得用YPD,我也一直用YPD,不过你可以都试试。。。
Start_everyday_with_a_new_hope,_leave_bad_memories...
9楼2013-12-27 10:23:16
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luwei13566

木虫 (正式写手)

引用回帖:
9楼: Originally posted by lpzl at 2013-12-27 10:23:16
我个人觉得用YPD,我也一直用YPD,不过你可以都试试。。。...

我一直用YPDS,YPD和山梨醇都摆在酵母面前,酵母想吃哪个吃哪个,吃腻了可以换换口味。。。
大家相互帮助哈
10楼2013-12-27 11:15:10
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