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zzl2516

金虫 (小有名气)

[求助] 荧光定量PCR溶解曲线问题 已有4人参与

本人做荧光定量PCR,做标曲是5倍稀释了5个点,用的是两步法,95度15s,63度1分钟,但是标曲后两个点也就是浓度低的两个点总是有杂峰,不知道应该怎么调整反应条件,求大神指导
荧光定量PCR溶解曲线问题
这是5个点的溶解曲线
荧光定量PCR溶解曲线问题-1
荧光定量PCR溶解曲线问题-2
这是后两个点的溶解曲线
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什么果

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
5楼: Originally posted by president114 at 2014-04-28 11:03:36
模板调成 150 ng/ul,你可以把稀释倍数换一下 1 4 16 64 256,,5倍稀释最后几个基本上就检测不到了~

你好~你的意思是说先把模板调成150ng/ul,再以此为母液进行倍比稀释吗~
7楼2015-10-05 18:28:05
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zzl2516

金虫 (小有名气)

没人回我。。自己顶一顶。。。
2楼2013-12-17 10:48:25
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2011210200

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
kx444555: 金币+3, 鼓励交流 2013-12-18 08:57:13
个人觉得,应该不是反应条件的问题,问题可能出在引物设计、和PCR体系配制的污染上。从你的溶解曲线上看,有很多峰值,说明有非特异性扩增或是大量的引物二聚体形成。
3楼2013-12-17 20:00:54
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jennifermatt

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

学习一下。我只遇到过一个杂峰的情况
求是
4楼2013-12-26 09:17:59
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