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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 荧光定量PCR溶解曲线问题
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zzl2516

金虫 (小有名气)

[求助] 荧光定量PCR溶解曲线问题 已有4人参与

本人做荧光定量PCR，做标曲是5倍稀释了5个点，用的是两步法，95度15s，63度1分钟，但是标曲后两个点也就是浓度低的两个点总是有杂峰，不知道应该怎么调整反应条件，求大神指导
荧光定量PCR溶解曲线问题
这是5个点的溶解曲线
荧光定量PCR溶解曲线问题-1
荧光定量PCR溶解曲线问题-2
这是后两个点的溶解曲线
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1楼 2013-12-16 08:56:43
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president114

新虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

模板调成 150 ng/ul，你可以把稀释倍数换一下 1 4 16 64 256，,5倍稀释最后几个基本上就检测不到了~
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行路难多歧路
5楼2014-04-28 11:03:36
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zzl2516

金虫 (小有名气)
没人回我。。自己顶一顶。。。
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2楼2013-12-17 10:48:25
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2011210200

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+3, 鼓励交流 2013-12-18 08:57:13
个人觉得，应该不是反应条件的问题，问题可能出在引物设计、和PCR体系配制的污染上。从你的溶解曲线上看，有很多峰值，说明有非特异性扩增或是大量的引物二聚体形成。
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3楼2013-12-17 20:00:54
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jennifermatt

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

学习一下。我只遇到过一个杂峰的情况
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求是
4楼2013-12-26 09:17:59
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