24小时热门版块排行榜    

Znn3bq.jpeg
查看: 1223  |  回复: 7
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

奋斗不懈

银虫 (小有名气)

[求助] 克隆遇到测序的问题

本人最近在做一套克隆载体,需要接GFP和mcherry两个荧光蛋白,菌落pcr验证已经连到载体上,提质粒,酶切验证也正确,但是送测序后却测不出来, 测序的结果是‘ 测序后发现有重叠现象’。已经换过两个引物,还是出现同样的结果,不知道问题出在哪里,请大神们给指点迷津,在下不胜感激。
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

奋斗不懈

银虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by bolysu at 2013-12-03 18:15:01
你要比对下你的测序引物除了和载体结合外,是否还可以和目的基因结合。测序有重叠基本都是测序引物不合格,公司提供的所谓通用引物也不是万能的

我用的是目的基因(GFP和mcherry)上的引物,还用了启动子上的引物,测的结果都是重叠,不知是不是克隆出的问题,在重新做
6楼2013-12-04 16:37:41
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 8 个回答

blackrose8089

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
测序有重叠,是不是楼主的样品有污染?
jiayoubashaonian
2楼2013-12-03 16:26:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

bolysu

禁虫 (著名写手)

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励交流! 2013-12-03 20:27:17
本帖内容被屏蔽

3楼2013-12-03 18:15:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

gyesang

荣誉版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
这种情况,可能是你的质粒不是单克隆,果断把你的质粒重新转化挑单克隆抽质粒再送测序
学术问题讨论咨询发邮件gyesang@163.com
4楼2013-12-03 20:28:36
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 求调剂 +4 苦命人。。。 2026-04-18 4/200 2026-04-19 02:01 by 烟雨流涯
[考研] 生物学调剂 +10 纸扇zhishan 2026-04-13 10/500 2026-04-18 21:19 by zqndavala
[考研] 化学070300 求调剂 +29 哈哈哈^_^ 2026-04-12 29/1450 2026-04-18 15:56 by Equinoxhua
[考研] 化工学硕294分,求导师收留 +33 yzyzx 2026-04-12 37/1850 2026-04-17 23:00 by wunaiy88
[考研] 求调剂 +9 小聂爱学习 2026-04-16 11/550 2026-04-17 22:34 by chixmc
[考研] 一志愿华中农业071010,320求调剂 +17 困困困困坤坤 2026-04-14 19/950 2026-04-17 20:08 by 关一盏灯cd
[有机交流] 二苯甲酮酸类衍生物 50+3 小白爱主人 2026-04-17 6/300 2026-04-17 18:47 by kf2781974
[考研] 294求调剂 +7 淡然654321 2026-04-17 8/400 2026-04-17 16:36 by wutongshun
[论文投稿] 有没有接收比较快的sci期刊呀,最好在一个月之内的,研三孩子求毕业 20+4 之护着 2026-04-16 5/250 2026-04-17 10:02 by bobvan
[考研] 322求调剂 +8 123安康 2026-04-12 15/750 2026-04-16 11:07 by Espannnnnol
[考研] 279学硕食品专业求调剂院校 20+7 孤独的狼爱吃羊 2026-04-12 29/1450 2026-04-16 09:00 by screening
[考研] 求调剂学校 +14 不会吃肉 2026-04-13 16/800 2026-04-15 21:59 by noqvsozv
[考研] 一志愿A区211,22408 321求调剂 +6 随心所欲☆ 2026-04-15 7/350 2026-04-15 21:45 by lbsjt
[考研] 药学求调剂 +11 RussHu 2026-04-12 13/650 2026-04-15 19:07 by zhuwenxu
[考研] 297工科调剂? +14 河南农业大学-能 2026-04-13 15/750 2026-04-15 13:25 by 黑科技矿业
[考研] 085600材料与化工329分求调剂 +24 叶zilin 2026-04-13 25/1250 2026-04-14 09:20 by 试管破裂
[考研] 考研英一数一338分 +9 长江大学东校区 2026-04-13 10/500 2026-04-14 00:41 by 王珺璞
[考研] 一志愿中南大学 0855 机械 286 求调剂 +11 不会吃肉 2026-04-12 11/550 2026-04-13 21:59 by bljnqdcc
[考研] +10 李多米lee. 2026-04-12 11/550 2026-04-12 22:58 by yuyin1233
[考研] 调剂结束 +6 floriea 2026-04-12 8/400 2026-04-12 18:13 by zhouxiaoyu
信息提示
请填处理意见