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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 克隆遇到测序的问题
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奋斗不懈

银虫 (小有名气)

[求助] 克隆遇到测序的问题

本人最近在做一套克隆载体，需要接GFP和mcherry两个荧光蛋白，菌落pcr验证已经连到载体上，提质粒，酶切验证也正确，但是送测序后却测不出来， 测序的结果是‘ 测序后发现有重叠现象’。已经换过两个引物，还是出现同样的结果，不知道问题出在哪里，请大神们给指点迷津，在下不胜感激。
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1楼 2013-12-03 16:23:57
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奋斗不懈

银虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by bolysu at 2013-12-03 18:15:01
你要比对下你的测序引物除了和载体结合外，是否还可以和目的基因结合。测序有重叠基本都是测序引物不合格，公司提供的所谓通用引物也不是万能的

我用的是目的基因（GFP和mcherry）上的引物，还用了启动子上的引物，测的结果都是重叠，不知是不是克隆出的问题，在重新做
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6楼2013-12-04 16:37:41
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blackrose8089

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
测序有重叠，是不是楼主的样品有污染？
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jiayoubashaonian
2楼2013-12-03 16:26:43
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bolysu

禁虫 (著名写手)
★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励交流！ 2013-12-03 20:27:17
本帖内容被屏蔽
3楼2013-12-03 18:15:01
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gyesang

荣誉版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
这种情况，可能是你的质粒不是单克隆，果断把你的质粒重新转化挑单克隆抽质粒再送测序
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学术问题讨论咨询发邮件gyesang@163.com
4楼2013-12-03 20:28:36
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