应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » PCR优化问题 求助
51/1返回列表
查看: 2404  |  回复: 19
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

小星丹925

木虫 (著名写手)

[交流] PCR优化问题 求助

这是我做148bp 的IL-2 梯度PCR图，首先我设计的引物具体信息是 S: 5'  TGGCTGTATTTCGGTAGCAATG  3'  
A: 5'  TGGTGTGTAGAGCTCGAGATGAA  3'      GT%,TM 值如图

体系为95度3min； 94度30s，退火梯度30s，72度30s 35个循环，72度5min
梯度pcr温度从左到右分别为 64, 63.3 ,59.6 ,56.7 .54.4，52.8
结果很奇怪，自己片段一个都没有出，出的片段比目的基因大，而且还有很多二聚体，求高人指点，问题出在哪呢？根据结果分析 引物，cDNA，pcr体系和退火温度的设定哪个设的不对么？请大家多给点意见，谢谢
还有哦，大家可以看下我的内参基因就跑出来了如图3，还挺亮的，不知道是不是能排除cDNA的问题呢？
PCR优化问题 求助
图片2.png


PCR优化问题 求助-1
IMG_1650.JPG


PCR优化问题 求助-2
IMG_1651.JPG
PCR优化问题 求助-3
图3 右边的pcr条带是B-actin内参.JPG



[ Last edited by 小星丹925 on 2013-12-5 at 10:19 ]
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:

» 抢金币啦！回帖就可以得到:

查看全部散金贴
1楼 2013-12-03 13:16:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

小星丹925

木虫 (著名写手)
引用回帖:
6楼: Originally posted by huahu3600 at 2013-12-04 16:28:50
148bp那么短，直接全基因合成，500块钱搞定。
两头想加什么加什么。

啊？我是想做荧光定量，片段最好在150bp左右~~~
赞一下 回复此楼
7楼2013-12-04 21:25:49
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 20 个回答

yuxiangdan

木虫 (正式写手)
★ ★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
gyesang: 金币+2, 鼓励交流！ 2013-12-03 20:26:43
小星丹925: 金币+2 2013-12-05 10:20:01
不知道你那引物设计的位置可不可以改，至少可以看出你这引物设计的不合理，再看看引物设计的原则吧！换个位置设计吧

[ 发自小木虫客户端 ]
赞一下 回复此楼
2楼2013-12-03 16:49:37
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

小星丹925

木虫 (著名写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by yuxiangdan at 2013-12-03 16:49:37
不知道你那引物设计的位置可不可以改，至少可以看出你这引物设计的不合理，再看看引物设计的原则吧！换个位置设计吧

怎么看出来的位置不合理呢？能详细说一下么？谢谢
赞一下 回复此楼
3楼2013-12-03 17:43:49
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yuxiangdan

木虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
3楼: Originally posted by 小星丹925 at 2013-12-03 17:43:49
怎么看出来的位置不合理呢？能详细说一下么？谢谢...

那引物设计软件有那么多found

[ 发自小木虫客户端 ]
赞一下 回复此楼
4楼2013-12-03 18:31:37
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 20 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭