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残刀无痕

新虫 (初入文坛)

[求助] 求助:农杆菌菌液PCR无阳性

我用大肠杆菌质粒电转农杆菌感受态!由于是第一次,转化的过程中不小心复苏时放在37度摇床摇了1h,然后涂皿。两天多之后才长了斑,师兄说转农杆菌阳性率高,所以只挑了4个斑,然后又在37度摇了7h,之后才放入28度摇床,摇了12h后吸菌液pcr检测,无带。然后再挑6个,28度摇12h,检测时加上前面的4个一起,还是无带。设置的大肠杆菌质粒对照都有带!pcr体系:mix 8ul,引物各0.5ul,菌液1ul,跑的普通的scar程序!
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