24小时热门版块排行榜    

北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
查看: 1815  |  回复: 10
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

xiaopeiliang

金虫 (小有名气)

[求助] 连接问题求助高手

最近在做一个连接,载体单酶切后,直接用T4连接酶连接涂板后居然不长,去磷酸化后就更不长了,更不要提连接目的片段的体系了,求解,纠结非常
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wangqi1107

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励交流! 2013-11-06 10:17:27
xiaopeiliang: 金币+2, 有帮助, 载体对照没有问题,其它的也尝试过啦 2013-11-06 22:52:22
第一:做个没有酶切的载体转化感受态做对照;第二:连接酶连其他东西看是不是失效;第三:抗生素有没有搞错;第四:培养条件是否正确;第五:转化条件是否正确。确定了这些问题之后,肯定会找到原因。
4楼2013-11-06 08:55:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 11 个回答

gyesang

荣誉版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
xiaopeiliang: 金币+1, 这个可以排除了 2013-11-06 22:49:38
请检查一下载体的抗性
学术问题讨论咨询发邮件gyesang@163.com
2楼2013-11-06 01:42:58
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2013-11-06 08:28:22
xiaopeiliang: 金币+2, 有帮助, 尝试不同去磷酸化量就是为了不过度去磷酸化,想找个合适的量,能够让载体自连几个,不知道合理不,其它的都尝试过啦,不是原因 2013-11-06 22:51:23
确定T4 ligase是不是失效了。载体单酶切连接发生自连,去磷酸化是为了避免自连,当然不会长了。另外,你的感受态细胞是否好用,是否转了为经酶切的载体质粒作为正对照?
3楼2013-11-06 07:44:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

bingdong05

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励交流! 2013-11-06 10:17:39
xiaopeiliang: 金币+2, 有帮助, 这些都常规的尝试过啦 2013-11-06 22:53:24
感受态木有问题的前提下,首先看下抗性是否正确,加的量是否过多;二,转化时利用空载体做个对照;三,检查载体和目的片段的比例是否合适,一般在1:3到1:10之间。
5楼2013-11-06 09:32:33
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 317分 一志愿南理工材料工程 本科湖工大 求调剂 +9 芋泥小铃铛 2026-03-28 9/450 2026-03-29 11:46 by longlotian
[考研] 311求调剂 +5 冬十三 2026-03-24 5/250 2026-03-29 08:55 by qingfeng258
[考研] 一志愿华东师范大学有机化学专业,初试351分,复试被刷求调剂! +3 真名有冰 2026-03-29 4/200 2026-03-29 08:47 by qingfeng258
[考研] 一志愿211 初试270分 求调剂 +8 谷雨上岸 2026-03-23 9/450 2026-03-29 01:00 by 我是小康
[考研] 295求调剂 +4 wei-5 2026-03-26 4/200 2026-03-28 23:20 by 小木虫tim
[考研] 学硕274求调剂 +9 Li李鱼 2026-03-26 9/450 2026-03-28 21:42 by bymhappy
[考研] 求调剂 +7 争取九点睡 2026-03-28 8/400 2026-03-28 21:07 by 争取九点睡
[考研] 311(085601)求调剂 +4 liziyeyeye 2026-03-28 4/200 2026-03-28 18:50 by 535743368
[考研] 一志愿南昌大学324求调剂 +7 hanamiko 2026-03-27 7/350 2026-03-28 09:56 by 李上岸0921
[考研] 291求调剂 +6 HanBeiNingZC 2026-03-24 6/300 2026-03-28 07:55 by baoball
[考研] 安徽大学专硕生物与医药专业(086000)324分,英语已过四六级,六级521,求调剂 +4 美味可乐鸡翅 2026-03-26 4/200 2026-03-27 15:27 by 星空星月
[考研] 274求调剂 +17 顾九笙要谦虚 2026-03-24 23/1150 2026-03-27 15:16 by caszguilin
[考研] 求调剂 +3 刘柯@ 2026-03-24 4/200 2026-03-27 11:28 by shangxh
[考研] 求调剂,一志愿 南京航空航天大学大学 ,080500材料科学与工程学硕 +4 @taotao 2026-03-26 5/250 2026-03-27 08:10 by hypershenger
[考研] 0703化学求调剂 +3 丹青奶盖 2026-03-26 5/250 2026-03-26 20:11 by macy2011
[考研] 材料调剂 5+4 想要一壶桃花水 2026-03-25 10/500 2026-03-26 19:56 by 不吃魚的貓
[考研] 085601求调剂总分293英一数二 +4 钢铁大炮 2026-03-24 4/200 2026-03-26 16:28 by dick_runner
[考研] 环境专硕324分求调剂推荐 +5 轩小宁—— 2026-03-26 5/250 2026-03-26 12:05 by i_cooler
[考研] 化学调剂一志愿上海交通大学336分-本科上海211 +4 小鱼爱有机 2026-03-25 4/200 2026-03-26 10:19 by aa331100
[考研] 336化工调剂 +4 王大坦1 2026-03-23 5/250 2026-03-23 18:32 by allen-yin
信息提示
请填处理意见