24小时热门版块排行榜    

查看: 1615  |  回复: 10
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

lance-tan

金虫 (小有名气)

[求助] 细菌V3区扩增

RT..最近做的细菌V3区扩增想做下DGGE,但是非特异性条带一直很多,退火温度调节了好几次还是没很好的改善。能否请各位看下帮我解决一下
体系如下
2xmix 25ul  
338F 1ul  
518R 1ul
模板  1ul
ddH2O 补足 50ul  (模板为16S 的产物)
程序
94℃             5 min
94℃             5 min
65℃(-0.5℃)0.5 min    20cycle(第2-4步)     
72℃             3 min   
94℃             1 min
55℃            0.5min         10cycle(第5-7步)
72℃             3 min
72℃             10min
在下比较着急啊  请各位帮帮忙。。
细菌V3区扩增
${{RQUFR(I4VCIF]E}Y{U~2.jpg
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

新手入门求各位大神指导
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

快乐小托儿

银虫 (小有名气)

引用回帖:
8楼: Originally posted by zqp9110 at 2013-11-06 00:16:27
额,问题貌似还挺多
1.PCR反应各步骤的时间不需要那么长,长时间94℃对聚合酶活性有影响,V3区一共就150多bp,延伸时间30s足够。
2.环境样本用touchdown没错,但总体循环数可少一些,比如20个循环,可减少非特异。 ...

请问re-conditioning PCR是怎么做的呢
条件是怎么样的呢
谢谢啊

[ 发自小木虫客户端 ]
9楼2013-11-06 00:22:41
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 11 个回答

lhf903

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
模板是提取的什么样品,感觉你第2-4步解链时间有点太长了吧,需要这么久解链嘛
2楼2013-11-05 10:56:00
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lance-tan

金虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by lhf903 at 2013-11-05 10:56:00
模板是提取的什么样品,感觉你第2-4步解链时间有点太长了吧,需要这么久解链嘛

是土壤样品的总DNA,那需要怎么调整呢?
新手入门求各位大神指导
3楼2013-11-05 12:12:39
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

dllchina

木虫 (著名写手)

有机的微生物大神

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
lance-tan: 金币+5, ★★★很有帮助 2013-11-05 13:11:50
lance-tan: 金币+5, ★★★很有帮助 2013-11-05 13:12:15
楼主,发个文档给你看看

» 本帖附件资源列表

  • 欢迎监督和反馈:小木虫仅提供交流平台,不对该内容负责。
    本内容由用户自主发布,如果其内容涉及到知识产权问题,其责任在于用户本人,如对版权有异议,请联系邮箱:xiaomuchong@tal.com
  • 附件 1 : 细菌16S_rDNA_V3区的PCR-DGGE分析.doc
  • 2013-11-05 12:30:18, 49 K
4楼2013-11-05 12:30:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 考研调剂 +4 呼呼?~+123456 2026-03-24 4/200 2026-03-24 23:16 by barlinike
[考研] 材料调剂 +6 匹克i 2026-03-23 6/300 2026-03-24 21:09 by greychen00
[考研] 085600材料与化工调剂 +8 A-哆啦Z梦 2026-03-23 13/650 2026-03-24 21:05 by greychen00
[考研] 274求调剂 +5 顾九笙要谦虚 2026-03-24 5/250 2026-03-24 18:43 by jhhcooi
[考研] 求调剂一志愿武汉理工大学材料工程(085601) +5 WW.' 2026-03-23 7/350 2026-03-24 14:50 by sprinining
[考研] 085404电子信息284分求调剂 +4 13659058978 2026-03-24 4/200 2026-03-24 12:15 by syl20081243
[考研] 一志愿山东大学药学学硕求调剂 +3 开开心心没烦恼 2026-03-23 4/200 2026-03-24 00:06 by 开开心心没烦恼
[考研] 求材料,环境专业调剂 +3 18567500178 2026-03-18 3/150 2026-03-23 23:50 by 热情沙漠
[考研] 384求调剂 +3 子系博 2026-03-22 6/300 2026-03-23 21:45 by 子系博
[考研] 考研化学308分求调剂 +7 你好明天你好 2026-03-23 8/400 2026-03-23 18:39 by macy2011
[考研] 293求调剂 +3 涛涛Wjt 2026-03-22 5/250 2026-03-22 22:21 by jiangpengfei
[考研] 280分求调剂 一志愿085802 +4 PUMPT 2026-03-22 7/350 2026-03-22 22:13 by 星空星月
[考研] 寻找调剂 +4 倔强芒? 2026-03-21 4/200 2026-03-22 16:14 by 木托莫露露
[考研] 一志愿华中科技大学071000,求调剂 +4 沿岸有贝壳6 2026-03-21 4/200 2026-03-22 07:21 by ilovexiaobin
[考研] 336求调剂 +5 rmc8866 2026-03-21 5/250 2026-03-21 17:24 by 学员8dgXkO
[考研] 265求调剂 +12 梁梁校校 2026-03-19 14/700 2026-03-21 13:38 by lature00
[考研] 一志愿华中科技大学,080502,354分求调剂 +5 守候夕阳CF 2026-03-18 5/250 2026-03-21 01:06 by JourneyLucky
[考研] 一志愿西南交大,求调剂 +5 材化逐梦人 2026-03-18 5/250 2026-03-21 00:26 by JourneyLucky
[考研] 353求调剂 +3 拉钩不许变 2026-03-20 3/150 2026-03-20 19:56 by JourneyLucky
[考研] 求调剂 +3 @taotao 2026-03-20 3/150 2026-03-20 19:35 by JourneyLucky
信息提示
请填处理意见