应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 建库酶切问题求助！！
北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
51/1返回列表
查看: 1961  |  回复: 20
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

浅歌99

实习版主

优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！

[求助] 建库酶切问题求助！！

建BAC文库时，提取了细胞核DNA然后进行低熔点琼脂糖的包埋，制成了这个包埋块。经过蛋白酶K的处理后，进行了不同浓度Hind III 的酶切，酶切了一个小时，之后跑的脉冲电泳，设置的场强为6V/cm，跑了20个小时。得到的这个结果。两侧的泳道是marker，中间泳道是酶切DNA的结果，设置了Hind III 酶的浓度梯度，从左到右分别为0U 2U 4U 6U 8U 10U。但跑出来基本上没有什么差别。很急，周围没有做这方面的，各位大侠指导一下吧！谢了！！
回复此楼

» 本帖附件资源列表

  • 欢迎监督和反馈：小木虫仅提供交流平台，不对该内容负责。
    本内容由用户自主发布，如果其内容涉及到知识产权问题，其责任在于用户本人，如对版权有异议，请联系邮箱：xiaomuchong@tal.com
  • 附件 1 : Chen_lab_2013副本.jpg
    • 2013-10-11 21:04:52, 158.15 K

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

分子生化实验经验积累

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2013-10-11 21:06:58
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

文库构建

版主

优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！

【答案】应助回帖

★ ★
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2013-10-24 19:04:30
构建BAC文库是一件非常复杂工作量的工作，大型BAC文库筛选更是一件庞大的工程。去年我们实验室试做构建过BAC文库，遇到很多疑问，由于项目紧迫，最终还是委托专业公司代做的。文库平均插入片段在100kb以上，均一性良好。文库质量还不错。希望你能顺利完成BAC文库构建筛选工作。
赞一下 回复此楼
3楼2013-10-17 09:33:25
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 21 个回答

wfmfj

超级版主

优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2013-10-14 21:46:29
浅歌99: 金币+5, ★★★★★最佳答案 2013-10-30 09:53:04
有没有设对照？未酶切对照和过量酶切对照都要设。
另外从图上可以看出你的plug质量很差，酶切一个小时也太长了，取1/3 plug做实验的话，正常情况下超过不要15min。可能蛋白、多糖或多酚类物质去除不干净，改善方法再重新制备plug吧。
赞一下 回复此楼

» 本帖已获得的红花（最新10朵）

浅歌99
扣鼻屎的姿势很帅
2楼2013-10-14 16:23:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

浅歌99

管理员

优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！
送红花一朵
引用回帖:
2楼: Originally posted by wfmfj at 2013-10-14 16:23:54
有没有设对照？未酶切对照和过量酶切对照都要设。
另外从图上可以看出你的plug质量很差，酶切一个小时也太长了，取1/3 plug做实验的话，正常情况下超过不要15min。可能蛋白、多糖或多酚类物质去除不干净，改善方法 ...

好，我试试再做一下。已经制成的胶块还有办法改善一下吗？
赞一下 回复此楼
4楼2013-10-24 14:37:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

浅歌99

实习版主

优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！
引用回帖:
3楼: Originally posted by 文库构建 at 2013-10-17 09:33:25
构建BAC文库是一件非常复杂工作量的工作，大型BAC文库筛选更是一件庞大的工程。去年我们实验室试做构建过BAC文库，遇到很多疑问，由于项目紧迫，最终还是委托专业公司代做的。文库平均插入片段在100kb以上，均一性良 ...

真感谢你。我周围没有做过这方面的，感觉现在很无助。如果可以的话，希望以后有问题也能向你请教。
赞一下 回复此楼
5楼2013-10-24 14:39:42
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 21 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 292求调剂 +8 木虫er12138 2026-04-01 8/400 2026-04-01 11:23 by wangjy2002
[考研] 070300求调剂306分 +5 26要上岸 2026-03-27 5/250 2026-04-01 11:09 by oooqiao
[考研] 材料调剂 +9 一样YWY 2026-04-01 9/450 2026-04-01 10:34 by EBSD
[考研] 350求调剂 +6 阿佳～ 2026-03-31 6/300 2026-04-01 08:49 by 不吃魚的貓
[考研] 311（085601）求调剂 +12 liziyeyeye 2026-03-28 13/650 2026-04-01 00:34 by fmesaito
[考研] 335求调剂 +3 321* 2026-03-31 4/200 2026-04-01 00:00 by 321*
[考研] 化学308分调剂 +11 你好明天你好 2026-03-30 12/600 2026-03-31 19:14 by 杨金金金
[考研] 317求调剂 +12 蛋黄咸肉粽 2026-03-26 13/650 2026-03-31 16:44 by asdfzly
[考研] 340求调剂 +4 希望如此i 2026-03-31 4/200 2026-03-31 16:40 by 690616278
[考研] 085601 材料工程 313分 求调剂 +6 Ong3 2026-03-27 6/300 2026-03-31 15:18 by yanflower7133
[考研] 286求调剂 +6 Faune 2026-03-30 6/300 2026-03-31 14:37 by jp9609
[考研] 英一数一总分334求调剂 +4 陈阳坤 2026-03-31 4/200 2026-03-31 14:22 by 记事本2026
[考研] 一志愿大连理工大学，机械工程学硕，341 +3 西瓜田的守望者 2026-03-30 3/150 2026-03-31 11:08 by asdfzly
[考研] 求调剂 +7 青春裁为三截 2026-03-29 7/350 2026-03-30 13:14 by laoshidan
[考研] 求调剂，一志愿 南京航空航天大学大学 ，080500材料科学与工程学硕 +6 @taotao 2026-03-26 7/350 2026-03-30 10:43 by 我是小康
[考研] 329求调剂 +10 钮恩雪 2026-03-25 10/500 2026-03-29 13:32 by peike
[考研] 085405 考的11408求各位老师带走 +3 Qiu学ing 2026-03-28 3/150 2026-03-28 09:19 by 乐呵呵的追梦人
[考研] 285求调剂 +4 AZMK 2026-03-27 7/350 2026-03-27 20:59 by AZMK
[考研] 调剂 +3 李嘉图·S·路 2026-03-27 3/150 2026-03-27 11:19 by wangjy2002
[考研] 机械学硕310分，数一英一，一志愿211本科双非找调剂信息 +3 @357 2026-03-25 3/150 2026-03-26 16:34 by by.MENG
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭