应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 建库酶切问题求助！！
51/1返回列表
查看: 2213  |  回复: 20
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

浅歌99

新虫 (初入文坛)

[求助] 建库酶切问题求助！！

建BAC文库时，提取了细胞核DNA然后进行低熔点琼脂糖的包埋，制成了这个包埋块。经过蛋白酶K的处理后，进行了不同浓度Hind III 的酶切，酶切了一个小时，之后跑的脉冲电泳，设置的场强为6V/cm，跑了20个小时。得到的这个结果。两侧的泳道是marker，中间泳道是酶切DNA的结果，设置了Hind III 酶的浓度梯度，从左到右分别为0U 2U 4U 6U 8U 10U。但跑出来基本上没有什么差别。很急，周围没有做这方面的，各位大侠指导一下吧！谢了！！
回复此楼

» 本帖附件资源列表

  • 欢迎监督和反馈：小木虫仅提供交流平台，不对该内容负责。
    本内容由用户自主发布，如果其内容涉及到知识产权问题，其责任在于用户本人，如对版权有异议，请联系邮箱：xiaomuchong@tal.com
  • 附件 1 : Chen_lab_2013副本.jpg
    • 2013-10-11 21:04:52, 158.15 K

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

分子生化实验经验积累

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2013-10-11 21:06:58
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

文库构建

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2013-10-24 19:04:30
构建BAC文库是一件非常复杂工作量的工作，大型BAC文库筛选更是一件庞大的工程。去年我们实验室试做构建过BAC文库，遇到很多疑问，由于项目紧迫，最终还是委托专业公司代做的。文库平均插入片段在100kb以上，均一性良好。文库质量还不错。希望你能顺利完成BAC文库构建筛选工作。
赞一下 回复此楼
3楼2013-10-17 09:33:25
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 21 个回答

wfmfj

金虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2013-10-14 21:46:29
浅歌99: 金币+5, ★★★★★最佳答案 2013-10-30 09:53:04
有没有设对照？未酶切对照和过量酶切对照都要设。
另外从图上可以看出你的plug质量很差，酶切一个小时也太长了，取1/3 plug做实验的话，正常情况下超过不要15min。可能蛋白、多糖或多酚类物质去除不干净，改善方法再重新制备plug吧。
赞一下 回复此楼

» 本帖已获得的红花（最新10朵）

浅歌99
扣鼻屎的姿势很帅
2楼2013-10-14 16:23:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

浅歌99

新虫 (初入文坛)
送红花一朵
引用回帖:
2楼: Originally posted by wfmfj at 2013-10-14 16:23:54
有没有设对照？未酶切对照和过量酶切对照都要设。
另外从图上可以看出你的plug质量很差，酶切一个小时也太长了，取1/3 plug做实验的话，正常情况下超过不要15min。可能蛋白、多糖或多酚类物质去除不干净，改善方法 ...

好，我试试再做一下。已经制成的胶块还有办法改善一下吗？
赞一下 回复此楼
4楼2013-10-24 14:37:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

浅歌99

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 文库构建 at 2013-10-17 09:33:25
构建BAC文库是一件非常复杂工作量的工作，大型BAC文库筛选更是一件庞大的工程。去年我们实验室试做构建过BAC文库，遇到很多疑问，由于项目紧迫，最终还是委托专业公司代做的。文库平均插入片段在100kb以上，均一性良 ...

真感谢你。我周围没有做过这方面的，感觉现在很无助。如果可以的话，希望以后有问题也能向你请教。
赞一下 回复此楼
5楼2013-10-24 14:39:42
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 21 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 能否退出参与的面上项目解除限项 +16 koalala 2026-08-24 18/900 2026-08-24 15:43 by zhuzg0628
[基金申请] 如果此刻你正在为国基感到焦虑，不妨来听听这首《基金之外》 +3 scalable 2026-08-24 3/150 2026-08-24 15:02 by arzu_hma
[基金申请] 今日不放榜？网传国自然预计 8 月 27 日可查结果 +17 医学老男孩 2026-08-20 21/1050 2026-08-24 14:21 by refreshing11
[基金申请] 我面上完蛋了 +8 且听虎啸 2026-08-20 9/450 2026-08-24 13:52 by zzuzxg
[基金申请] 2026国自然函评费到账 +17 羊腰板 2026-08-21 18/900 2026-08-24 12:03 by iaeyuan
[基金申请] 建议基金发布提前给出明确的时间点 +12 kulium 2026-08-21 15/750 2026-08-24 12:02 by iaeyuan
[基金申请] 朋友圈看到的 +7 wangzilk 2026-08-18 9/450 2026-08-24 10:50 by cmrandy
[基金申请] 让我中一个面上吧！ +13 大萍1987 2026-08-20 16/800 2026-08-24 10:23 by 太傻了
[基金申请] 放榜前的不淡定 20+4 snowwithsea 2026-08-19 17/850 2026-08-24 10:20 by echo8914667
[基金申请] 2026年的国家社科基金项目通讯评审的新规则与新动向、新挑战 +4 process2012 2026-08-23 5/250 2026-08-23 19:58 by jurkat.1640
[教师之家] 跳槽后在研项目怎么办？ +5 简单化xn 2026-08-22 10/500 2026-08-23 12:38 by 简单化xn
[基金申请] 93BebMhtakh前后11位开头都是大写 +7 且听虎啸 2026-08-17 8/400 2026-08-22 21:55 by 医学老男孩
[基金申请] filecode，4个jtjc了 +13 ziyangfang 2026-08-19 16/800 2026-08-22 17:08 by WH3796
[基金申请] 今天基金会出结果吗？20260819 +16 kkkl_v 2026-08-19 17/850 2026-08-22 16:12 by 阿布Abu
[基金申请] 时间戳今天，20号变了 +5 archvillain 2026-08-20 5/250 2026-08-22 06:12 by hui_daxiao
[基金申请] 看来今天不会放榜了？ +8 chengyan1220 2026-08-21 11/550 2026-08-21 17:52 by dcqxinyang
[基金申请] 时间戳又变了 +13 wuchongjun 2026-08-20 19/950 2026-08-21 17:21 by 紫杉醇
[论文投稿] 投稿咨询 +5 wwm09 2026-08-17 7/350 2026-08-21 10:11 by 期刊论文帮手
[基金申请] 基金啊基金 +4 longfie172 2026-08-20 4/200 2026-08-21 08:58 by mark mao
[基金申请] 今天维护系统维护 祝所有人 高中 +8 gjjjzhong 2026-08-18 9/450 2026-08-18 13:01 by 家与远方
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭