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pycraze

木虫 (小有名气)

[求助] PCR引物必须与目的基因片段的一小段序列互补吗?急!!!

跑PCR前,设计引物时,引物序列必须是与目的基因片段的一小段序列互补的吗?还是可以在目的基因序列以外设计引物呢?急!!!
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pycraze

木虫 (小有名气)

引用回帖:
7楼: Originally posted by joan198108 at 2013-10-12 10:04:45
如果是扩增已知序列目的全长基因,肯定是要在基因序列外部设计引物,当然接下来还有克隆表达等操作,最好在引物设计时考虑增加酶切位点以及添加序列标签等。如果是扩增未知序列基因,一般要根据序列比对找到保守序列 ...

为什么扩增已知序列目的全长基因,引物要设计在基因序列外部???不可以设置在基因序列的两端吗?(刚好与基因序列两端的十几二十个核苷酸互补。)
8楼2013-10-12 18:46:44
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liyongliangx

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与,应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰,手有余香。分子生物期待更详细的解答 2013-10-10 09:56:41
随意啊,只要能扩增到你需要的片段就行了。
2楼2013-10-09 22:40:18
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★
感谢参与,应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰,手有余香。分子生物期待更详细的解答 2013-10-10 09:56:47
要看你PCR的目的是什么。如果是克隆基因片段,引物的位置是大致固定的,如果是检测样本中是否有目的片段,引物选取的自由度较大,位置比较随意。
3楼2013-10-10 03:24:59
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pycraze

木虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-10-10 03:24:59
要看你PCR的目的是什么。如果是克隆基因片段,引物的位置是大致固定的,如果是检测样本中是否有目的片段,引物选取的自由度较大,位置比较随意。

那如果是克隆基因片段,引物的位置大致固定在哪儿?那要是克隆基因全长呢,引物的位置在哪儿比较好?多谢指教~
4楼2013-10-10 08:20:00
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