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pycraze

木虫 (小有名气)

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[求助] PCR引物必须与目的基因片段的一小段序列互补吗？急！！！

跑PCR前，设计引物时，引物序列必须是与目的基因片段的一小段序列互补的吗？还是可以在目的基因序列以外设计引物呢?急！！！

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1楼 2013-10-09 22:09:33

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joan198108

铁杆木虫 (正式写手)

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【答案】应助回帖

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kx444555: 金币+3, 鼓励交流 2013-10-12 11:33:29

如果是扩增已知序列目的全长基因，肯定是要在基因序列外部设计引物，当然接下来还有克隆表达等操作，最好在引物设计时考虑增加酶切位点以及添加序列标签等。如果是扩增未知序列基因，一般要根据序列比对找到保守序列，设计兼并引物，扩增产物一般是目的基因的部分序列，还要通过3'、5‘race以及染色体步移等操作得到全长序列。