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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 蓝白斑筛选的有关问题
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KEVIN_LOVE

木虫 (正式写手)

[求助] 蓝白斑筛选的有关问题 已有1人参与

如果插入的目标基因较小，仅使用蓝白斑筛选合适吗？对于白色菌落还需要做哪些进一步的鉴定？
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1楼 2013-10-06 09:47:40
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ifyousee

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+3, 鼓励交流 2013-10-06 14:22:07
蓝白斑筛选没有意义啊。假阳性假阴性都很厉害，而且平板还要涂IPTG和X-gal预处理半小时。觉得蓝白斑和抗性筛选效果差不多，反正我们这边是直接涂布然后12h后挑单克隆溶于50ul灭菌水里，取2ul做模板PCR检测，剩下的接种30ul到EP管中，最后剩下的10ul不到留着后续特异性引物检测。我觉得PCR检测是最好的，先用通用引物检测，阳性的结果，再用自己设计的特异性引物
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3楼2013-10-06 13:52:15
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wqertyre

至尊木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2014-03-30 00:08:34
只做蓝白班可能会出现假阳性，建议再做下酶切、PCR以及测序吧
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善由心生
2楼2013-10-06 10:16:02
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kentgrey

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

我们是挑完菌后接着做菌液PCR确定有没有目的条带，再送样测序
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4楼2014-02-07 16:00:49
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