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KEVIN_LOVE

木虫 (正式写手)

[求助] 蓝白斑筛选的有关问题 已有1人参与

如果插入的目标基因较小,仅使用蓝白斑筛选合适吗?对于白色菌落还需要做哪些进一步的鉴定?
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wqertyre

至尊木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★
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gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流! 2014-03-30 00:08:34
只做蓝白班可能会出现假阳性,建议再做下酶切、PCR以及测序吧
善由心生
2楼2013-10-06 10:16:02
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ifyousee

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
kx444555: 金币+3, 鼓励交流 2013-10-06 14:22:07
蓝白斑筛选没有意义啊。假阳性假阴性都很厉害,而且平板还要涂IPTG和X-gal预处理半小时。觉得蓝白斑和抗性筛选效果差不多,反正我们这边是直接涂布然后12h后挑单克隆溶于50ul灭菌水里,取2ul做模板PCR检测,剩下的接种30ul到EP管中,最后剩下的10ul不到留着后续特异性引物检测。我觉得PCR检测是最好的,先用通用引物检测,阳性的结果,再用自己设计的特异性引物
3楼2013-10-06 13:52:15
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kentgrey

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

我们是挑完菌后接着做菌液PCR确定有没有目的条带,再送样测序
4楼2014-02-07 16:00:49
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