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KEVIN_LOVE

木虫 (正式写手)

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[求助] 蓝白斑筛选的有关问题已有1人参与

如果插入的目标基因较小，仅使用蓝白斑筛选合适吗？对于白色菌落还需要做哪些进一步的鉴定？

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1楼 2013-10-06 09:47:40

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wqertyre

至尊木虫 (职业作家)

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【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2014-03-30 00:08:34

只做蓝白班可能会出现假阳性，建议再做下酶切、PCR以及测序吧

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善由心生

2楼2013-10-06 10:16:02

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ifyousee

新虫 (小有名气)

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【答案】应助回帖

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kx444555: 金币+3, 鼓励交流 2013-10-06 14:22:07

蓝白斑筛选没有意义啊。假阳性假阴性都很厉害，而且平板还要涂IPTG和X-gal预处理半小时。觉得蓝白斑和抗性筛选效果差不多，反正我们这边是直接涂布然后12h后挑单克隆溶于50ul灭菌水里，取2ul做模板PCR检测，剩下的接种30ul到EP管中，最后剩下的10ul不到留着后续特异性引物检测。我觉得PCR检测是最好的，先用通用引物检测，阳性的结果，再用自己设计的特异性引物

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3楼2013-10-06 13:52:15

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