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融合PCR最后一步做不出来，求救！！！
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做3片段的融合PCR，左翼片段、抗性片段、右翼片段分别是800、2000、800bp，分别割胶回收后的浓度大约是70、120、70纳克/微升。 按摩尔比1:3:1的比例进行融合，第一个步10个循环，94度 30秒；57度 30秒；72度 4分钟，第一步用的是Pfu酶。 第二步取第一步的产物1微升作为模板，两侧F1、R2各2微升，5微升buffer，1微升dNTP(10mM)，0.5微升Ex taq. 第二步与第一步的反应温度一样，28个循环。 最后跑出来的条带很混乱，我的目的条带应该在3800左右，可是跑胶得到的条带好像被分解了一样，全都在1000左右。 求助各位达人，这是在哪里出了问题？  上图右向左数第三道就是我说的融合后产物跑胶结果。  预融合产物稀释1、10、100倍融合 2013-08-20 10 小时 02 分钟.jpg |
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 核酸生物学实验经验 |
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liyongliangx
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