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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 多糖多酚含量较高的植物提RNA
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friya0910

新虫 (正式写手)

[交流] 多糖多酚含量较高的植物提RNA 已有2人参与

有人提过多糖多酚含量高的植物体RNA吗？我现在做百合花柱的RNA提取，用了专门针对多糖多酚含量高的植物的提取试剂盒，可是最后一步溶解RNA的时候还是特别不好溶，跑胶发现孔里很亮，应该是有多糖杂质，RNA两条带还是比较完整的！这会影响我后面的反转录和PCR吗？反正现在做了几次RT-PCR，都没做出来！
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1楼 2011-05-11 19:18:39
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疯狂修行者

木虫 (正式写手)
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dhd997(金币+5): 鼓励交流 2011-05-12 09:23:33
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Originally posted by friya0910 at 2011-05-11 19:18:39:
有人提过多糖多酚含量高的植物体RNA吗？我现在做百合花柱的RNA提取，用了专门针对多糖多酚含量高的植物的提取试剂盒，可是最后一步溶解RNA的时候还是特别不好溶，跑胶发现孔里很亮，应该是有多糖杂质，RNA两条带还 ...

RNA应该是三条带啊，你换用英俊的Trizol提提试试，公司的试剂盒有时候不可信的，还有你测每次OD值，比值是多少？应该在1.8-2.0最好。你PCR做不出来，也可能是其他因素的问题，你批的目的条带如果比较大，也是不容易得到的，你可以找一个持家基因批一下，就知道你的RNA是否可用了。祝你试验顺利！
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戒骄戒躁，坦荡做人，平常心做事，享受生活之美！！
2楼2011-05-12 09:09:05
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疯狂修行者

木虫 (正式写手)
如果是RT-PCR没做出来，你可以拿别人没问题的RNA做一下，看看能不能出来，这样排除RT-PCR试剂或操作的问题。
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3楼2011-05-12 09:10:49
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friya0910

新虫 (正式写手)
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Originally posted by 疯狂修行者 at 2011-05-12 09:09:05:
RNA应该是三条带啊，你换用英俊的Trizol提提试试，公司的试剂盒有时候不可信的，还有你测每次OD值，比值是多少？应该在1.8-2.0最好。你PCR做不出来，也可能是其他因素的问题，你批的目的条带如果比较大，也是不 ...

我的目的基因不大，500bp左右吧，我的ＲＮＡ出来是三条带，但是第一条和第二条差不多亮度，关于你说的测紫外，我们实验室只有那种特别大的比色皿，用来测ＲＮＡ感觉太浪费了，而且我材料有限，提的量也不多，所以一般就跑个胶判断一下质量和浓度！找了一个持家基因，整准备合成呢！
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4楼2011-05-12 13:18:17
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疯狂修行者

木虫 (正式写手)
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Originally posted by friya0910 at 2011-05-12 13:18:17:
我的目的基因不大，500bp左右吧，我的ＲＮＡ出来是三条带，但是第一条和第二条差不多亮度，关于你说的测紫外，我们实验室只有那种特别大的比色皿，用来测ＲＮＡ感觉太浪费了，而且我材料有限，提的量也不多，所 ...

有专门的微量测定的比色杯，放100微升就可以。如果常做核酸可以买一个的。
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5楼2011-05-12 14:38:28
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friya0910

新虫 (正式写手)
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Originally posted by 疯狂修行者 at 2011-05-12 14:38:28:
有专门的微量测定的比色杯，放100微升就可以。如果常做核酸可以买一个的。

好的，那个比色皿可以在一般的紫外分光光度计上用吗？
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6楼2011-05-12 18:47:10
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疯狂修行者

木虫 (正式写手)
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Originally posted by friya0910 at 2011-05-12 18:47:10:
好的，那个比色皿可以在一般的紫外分光光度计上用吗？

可以，就是在一般紫外分光光度计上用的。
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7楼2011-05-13 10:08:16
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奔跑的乌拉龟

铜虫 (正式写手)
买一个nanodrop
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脚踏实地
8楼2013-04-19 16:26:57
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