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wei_suzhen

新虫 (小有名气)

[求助] 酶活测定方法

试剂用量/μL       测定管        对照管      
粗酶液             30             30                 
硫酸铵标准液      0               0               
无氨蒸馏水       2300           2300               
天门冬酰胺         200                 0                    
                      混匀,置37℃水浴30min
天门冬酰胺         0               200                    
水杨酸溶液        1200             1200                    
次氯酸钠溶液      100              100                     
这个的酶在国内外没有研究的,所以不知道怎么测酶活。酶活测定的原理是:酶和底物反应后产生氨,用氨与水杨酸、次氯酸钠在碱性条件下反应生成靛酚蓝,根据颜色深浅,比色定量,在650nm处测定吸光度,进而推算天门冬酰胺酶的活力。用此方法测酶活,是不是需要终止酶反应然后再加显色剂,显色反应30min?
或者有更好的测定方法吗?
一般高温终止酶反应需要多高的温度?多长时间?如果100度,20min能使酶失活吗?
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肃清华书

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰,手有余香。分子生物期待你更多精彩 。 2013-09-22 21:05:56
实验组和对照组在保温前用水平衡了吧,也就是相当于加200微的水给对照组,然后保温完再加200微水给实验组然后测定。
一般酶失活沸水浴15min就行,时间长点也没什么关系。。
2楼2013-09-22 13:19:19
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