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wei_suzhen

新虫 (小有名气)

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专业: 微生物遗传学

[求助] 酶活测定方法

试剂用量/μL    测定管       对照管
粗酶液          30          30
硫酸铵标准液    0             0
无氨蒸馏水    2300          2300
天门冬酰胺       200                0
                  混匀，置37℃水浴30min
天门冬酰胺       0             200
水杨酸溶液       1200          1200
次氯酸钠溶液    100             100
这个的酶在国内外没有研究的，所以不知道怎么测酶活。酶活测定的原理是：酶和底物反应后产生氨，用氨与水杨酸、次氯酸钠在碱性条件下反应生成靛酚蓝，根据颜色深浅，比色定量,在650nm处测定吸光度，进而推算天门冬酰胺酶的活力。用此方法测酶活，是不是需要终止酶反应然后再加显色剂，显色反应30min?
或者有更好的测定方法吗？
一般高温终止酶反应需要多高的温度？多长时间？如果100度，20min能使酶失活吗？

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