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wei_suzhen

新虫 (小有名气)

[求助] 酶活测定方法

试剂用量/μL       测定管        对照管      
粗酶液             30             30                 
硫酸铵标准液      0               0               
无氨蒸馏水       2300           2300               
天门冬酰胺         200                 0                    
                      混匀，置37℃水浴30min
天门冬酰胺         0               200                    
水杨酸溶液        1200             1200                    
次氯酸钠溶液      100              100                     
这个的酶在国内外没有研究的，所以不知道怎么测酶活。酶活测定的原理是：酶和底物反应后产生氨，用氨与水杨酸、次氯酸钠在碱性条件下反应生成靛酚蓝，根据颜色深浅，比色定量,在650nm处测定吸光度，进而推算天门冬酰胺酶的活力。用此方法测酶活，是不是需要终止酶反应然后再加显色剂，显色反应30min?
或者有更好的测定方法吗？
一般高温终止酶反应需要多高的温度？多长时间？如果100度，20min能使酶失活吗？
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1楼 2013-09-22 13:12:40
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肃清华书

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰，手有余香。分子生物期待你更多精彩 。 2013-09-22 21:05:56
实验组和对照组在保温前用水平衡了吧，也就是相当于加200微的水给对照组，然后保温完再加200微水给实验组然后测定。
一般酶失活沸水浴15min就行，时间长点也没什么关系。。
赞一下(1人) 回复此楼
2楼2013-09-22 13:19:19
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