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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » BAEE测定胰蛋白酶活性
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yunxiao8252

铜虫 (小有名气)

[求助] BAEE测定胰蛋白酶活性

小妹想请教各位大侠一下在用BAEE做底物测定胰蛋白酶活性的时候，加入氯化钙的作用是什么呀？
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1楼 2013-03-26 09:43:07
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ottolzm

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
yunxiao8252: 金币+20, ★★★很有帮助 2013-03-29 09:53:09
yunxiao8252: 金币+10, ★★★很有帮助 2013-03-29 10:48:34
加入氯化钙的目的是为了作为胰蛋白酶的金属离子结合体，钙离子会促进胰蛋白酶酶活
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2楼2013-03-28 23:53:23
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yunxiao8252

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by ottolzm at 2013-03-28 23:53:23
加入氯化钙的目的是为了作为胰蛋白酶的金属离子结合体，钙离子会促进胰蛋白酶酶活

可否再问一下大侠，在这个实验中胰蛋白酶是应该溶在1mM盐酸中的吗？我的实验过程中所测得的紫外吸收值非常低，只有0.0X，BAEE的浓度是0.01mM，pH=8.0，25度，主要的是没有呈增长的趋势，可否麻烦大侠帮忙推测下原因呀，呵呵，小妹化学出身，生物知识有限，如果问得太低能还望见谅，若能指点一二，定当感激不尽！
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3楼2013-03-29 09:58:32
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ottolzm

木虫 (正式写手)
★
gyesang: 金币+1, 鼓励回帖应助！ 2013-05-31 16:33:47
引用回帖:
3楼: Originally posted by yunxiao8252 at 2013-03-29 09:58:32
可否再问一下大侠，在这个实验中胰蛋白酶是应该溶在1mM盐酸中的吗？我的实验过程中所测得的紫外吸收值非常低，只有0.0X，BAEE的浓度是0.01mM，pH=8.0，25度，主要的是没有呈增长的趋势，可否麻烦大侠帮忙推测下原因 ...

胰蛋白酶应该溶解在1mM的HCL中 这是正确的
用BAEE的方法 可以控制胰蛋白酶的浓度 另外 BAEE定义胰蛋白酶酶活是通过胰蛋白酶反应后的在253nm下的吸光值的变化来反应的，吸光值每升高0.001即为一个胰蛋白酶酶活单位
具体的测定方法和测定的步骤可以参考这个：
http://www.sigmaaldrich.com/chin ... say-of-trypsin.html
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yunxiao8252
4楼2013-03-29 10:27:24
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yunxiao8252

铜虫 (小有名气)
送鲜花一朵
引用回帖:
4楼: Originally posted by ottolzm at 2013-03-29 10:27:24
胰蛋白酶应该溶解在1mM的HCL中 这是正确的
用BAEE的方法 可以控制胰蛋白酶的浓度 另外 BAEE定义胰蛋白酶酶活是通过胰蛋白酶反应后的在253nm下的吸光值的变化来反应的，吸光值每升高0.001即为一个胰蛋白酶酶活单位 ...

哦，好的，谢谢您！
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5楼2013-03-29 10:47:51
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yunxiao8252

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by ottolzm at 2013-03-29 10:27:24
胰蛋白酶应该溶解在1mM的HCL中 这是正确的
用BAEE的方法 可以控制胰蛋白酶的浓度 另外 BAEE定义胰蛋白酶酶活是通过胰蛋白酶反应后的在253nm下的吸光值的变化来反应的，吸光值每升高0.001即为一个胰蛋白酶酶活单位 ...

小妹还想再烦请大侠指点一下，如果要求出米氏常数，是还需要另外作产物的标准曲线吗？会要求底物的浓度远低于酶的浓度吗？
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6楼2013-03-30 10:00:45
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ottolzm

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ...
yunxiao8252: 金币+10, ★★★★★最佳答案, 哦哦，谢谢 2013-04-05 20:18:15
yunxiao8252: 金币+60, ★★★★★最佳答案 2013-04-14 16:09:26
引用回帖:
6楼: Originally posted by yunxiao8252 at 2013-03-30 10:00:45
小妹还想再烦请大侠指点一下，如果要求出米氏常数，是还需要另外作产物的标准曲线吗？会要求底物的浓度远低于酶的浓度吗？...

不需要做产物的的标准曲线 只需要底物的浓度低于酶的浓度即可  一般测定7个点即可
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7楼2013-03-30 20:59:47
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