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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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fyyzr

木虫 (小有名气)

[求助] 求助:纤维素合成酶 酶活性测定方法,谢谢!

求助,急需纤维素合成酶酶活性的测定方法,谢谢!第一次发帖,不对的地方见谅!谢谢!
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starseacow

专家顾问 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
fyyzr: 金币+4, 有帮助 2012-08-17 14:53:40
纤维素合成酶活性测定比较困难,常见的方法如下
Cellulose synthase activity in membrane preparations of A.
xylinum was determined according to the procedure of Lin and Brown (13). For
enzyme assays, approximately 150 mg of membrane protein was incubated at
308C for 30 min in a reaction mixture with a final concentration of 20 mM
UDP-[14C]glucose and 20 mM cyclic diguanylic acid (c-di-GMP) (gift from J. H.
van Boom, Department of Organic Chemistry, Leiden, The Netherlands), and
the radioactivity present in the alkali-insoluble product obtained after boiling
was used to determine the cellulose synthase activity. Protein concentrations
were determined by Peterson’s modification of the micro-Lowry method (19)
with a protein assay kit (Sigma).

方法参考自
Identification of a second cellulose synthase gene (acsAII) in Acetobacter xylinum
J. Bacteriol. 1995, 177(18):5276.

涉及到的其他文献包括
13 Lin, F. C., and R. M. Brown, Jr. 1989. Purification of cellulose synthase from
Acetobacter xylinum, p. 473–492. In C. Schuerch (ed.), Cellulose and wood—
chemistry and technology. John Wiley and Sons, New York.
19 Peterson, G. L. 1977. A simplification of the protein assay method of Lowry
et al. which is more generally applicable. Anal. Biochem. 83:346–356.

» 本帖已获得的红花(最新10朵)

植物生理群69993869,为避免广告,申请加入请提供木虫昵称,院校及专业信息
2楼2012-08-14 23:22:46
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fyyzr

木虫 (小有名气)

送鲜花一朵
引用回帖:
2楼: Originally posted by starseacow at 2012-08-14 23:22:46
纤维素合成酶活性测定比较困难,常见的方法如下
Cellulose synthase activity in membrane preparations of A.
xylinum was determined according to the procedure of Lin and Brown (13). For
enzyme assays,  ...

好的,谢谢!另外,请教个很低级的问题,但是我却比较迷糊,希望你别笑话,呵呵!就是我在看了一些文献,发现在提到纤维素合成过程中的重要酶类时,有的说是纤维素合成酶,有的则是纤维素合酶,而对植物纤维素合酶或者纤维素合成酶基因都采用了CesA代表以及相同的氨基酸个数···所以我就不清楚这是对同一酶叫法的不统一还是它两者本就不是同一种酶···谢谢!
3楼2012-08-15 08:56:26
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starseacow

专家顾问 (职业作家)

【答案】应助回帖

我不太熟悉纤维素代谢途径,但针对纤维素合成酶,应该就是CesA,你看到的不同可能是翻译的问题,还是以英文文献为准吧
植物生理群69993869,为避免广告,申请加入请提供木虫昵称,院校及专业信息
4楼2012-08-15 16:11:06
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ivychen1218

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

请问你找到测定纤维素合酶的方法了?我最近也要准备测定纤维素合酶的含量,正在纠结怎么做?
5楼2013-03-27 19:33:47
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