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wangxuanxuan铁杆木虫 (正式写手)
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【求助】土壤脲酶活性测定中的问题 已有38人参与
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我现在测土壤中的脲酶活性，用的是比色法。结果发现无土对照的数值很大，不清楚是什么原因。请哪位做过这方面的给解释下，谢谢。 试验步骤：试剂：1）甲苯 2）10%尿素：称取10g尿素，用水溶至100ml。 3）柠檬酸盐缓冲液（PH6.7）：184克柠檬酸和147.5克氢氧化钾溶于蒸馏水。将两溶液合并，用1mol/LNaOH将PH调至6.7，用水稀释至1000毫升。 4）苯酚钠溶液（1.35mol/L）：62.5克苯酚溶于少量乙醇，加2毫升甲醇和18.5毫升丙酮，用乙醇稀释至100毫升（A），存于冰箱中；27克NaOH溶于100毫升水（B）。将AB溶液保存在冰箱中。使用前将2溶液各20毫升混合，用蒸馏水稀释至100毫升。 5）次氯酸钠溶液：用水稀释试剂，至活性氯的浓度为0.9%，溶液稳定。 6）氮的标准溶液：a 精确称取0.4717克硫酸铵溶于水并稀释至1000ml，得到1ml含有0.1mg氮的标准液 标准曲线绘制：吸取配置好的氮溶液20ml，定容至100ml，即稀释了5倍，吸取1，3，5，7，9，11，13ml移至50ml容量瓶，加水至20ml，再加入4ml苯酚钠，仔细混合，加入3ml次氯酸钠，充分摇荡，放置20分钟,用水稀释至刻度。将着色液在紫外分光光度计上于578nm处进行比色测定，以标准溶液浓度为横坐标，以光密度值为纵坐标绘制曲线图。 1) 称取5g过1mm筛的风干土样于50ml容量瓶中。 2) 向容量瓶中加入1ml甲苯（以能全部使土样湿润为度）并放置15分钟 3) 之后加入10ml 10％尿素溶液和20ml柠檬酸缓冲液（PH6.7），并 仔细混合 4) 将容量瓶放入38摄氏度恒温箱中，培养3h 5) 培养结束后，用热至38摄氏度水稀释至刻度，仔细摇荡，并将悬液用致密滤纸过滤于三角瓶中。 6) 显色：吸取1ml滤液于50ml容量瓶中，加入10ml蒸馏水，充分震荡，然后加入4ml苯酚钠，仔细混合，再加入3ml次氯酸钠，充分摇荡，放置20分钟，用水稀释至刻度，溶液呈现（青定）酚的蓝色。 7) 1h内在（（青定）酚的蓝色在1h内保持稳定）在分光光度计上用1cm液槽，于578nm处将显色液进行比色测定。 8) 无土对照：不加土样，其他操作与样品实验相同。以检验试剂纯度，整个实验设置一个对照 9)无基质对照：以等体积的水代替基质，其他操作与样品实验相同。每个土样都设此对照。 结果计算：土壤脲酶活性以24小时后100g土壤中NH3－N的毫克数表示。 M＝（X样品－X无土－X无基质）*100*10 式中：M－土壤脲酶活性值 X样品――样品实验的光密度值在标准曲线上对应的NH3－N毫克数 X无土――无土对照实验中的光密度值在标准曲线上对应的NH3－N毫克数 X无基质――无基质对照实验中的光密度值在标准曲线上对应的NH3－N毫克数 100 ――样品定容的体积与测定时吸取量的比值 10 ――酶活性单位的土重与样品土重之比值 [ Last edited by wangxuanxuan on 2010-3-21 at 21:24 ] |
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