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lovezy530520木虫 (正式写手)
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p-NPP法测定脂肪酶活性p-NP标准曲线问题
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| 用该法测酶活标准溶液是不是也应该用tris-HCL缓冲液配制？之前用蒸馏水配制的标准溶液做出的标准曲线也资料相符，此次用缓冲液配制的标准溶液最大浓度（10ug/ML）的吸光度只有0.167（410处），请各位大牛给予指导，是我的方法不对吗？ |
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2楼2012-02-16 15:49:31
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zhang8826857(金币+1): 鼓励交流 2012-02-18 10:15:03
zhang8826857(金币+1): 鼓励交流 2012-02-18 10:15:03
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用该法测酶活标准溶液是不是也应该用tris-HCL缓冲液配制？之前用蒸馏水配制的标准溶液做出的标准曲线也资料相符，此次用缓冲液配制的标准溶液最大浓度（10ug/ML）的吸光度只有0.167（410处），请各位大牛给予指导，是我的方法不对吗？ 回答：你的方法有严重问题。 1.p-NP该底物的吸收光谱受溶液中的pH影响极大！ 碱性时其吸收最大，而且稳定。 你做p-NP的标准曲线时，应该用Na2CO3 溶液（例如0.5 M）的。 而不是用Tris-HCl或其他溶液。 2.你在实际测定时，反应完后，你的反应液应该用Na2CO3 溶液（例如 1M）与反应液同体积混合，一方面是为了产物的稳定，另一方面是终止了反应。 |
3楼2012-02-17 11:52:06
lovezy530520
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