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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » p-NPP法测定脂肪酶活性p-NP标准曲线问题
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lovezy530520

木虫 (正式写手)

[求助] p-NPP法测定脂肪酶活性p-NP标准曲线问题

用该法测酶活标准溶液是不是也应该用tris-HCL缓冲液配制？之前用蒸馏水配制的标准溶液做出的标准曲线也资料相符，此次用缓冲液配制的标准溶液最大浓度（10ug/ML）的吸光度只有0.167（410处），请各位大牛给予指导，是我的方法不对吗？
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1楼 2012-02-06 15:11:31
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10809036

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
我们只用tris缓冲液 ，好像。
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想要走得快，就单独上路；想要走得远，就结伴同行！！
2楼2012-02-16 15:49:31
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HarveyWang

捐助贵宾 (知名作家)

海外行者

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
zhang8826857(金币+1): 鼓励交流 2012-02-18 10:15:03
用该法测酶活标准溶液是不是也应该用tris-HCL缓冲液配制？之前用蒸馏水配制的标准溶液做出的标准曲线也资料相符，此次用缓冲液配制的标准溶液最大浓度（10ug/ML）的吸光度只有0.167（410处），请各位大牛给予指导，是我的方法不对吗？




回答：你的方法有严重问题。

1.p-NP该底物的吸收光谱受溶液中的pH影响极大！
碱性时其吸收最大，而且稳定。
你做p-NP的标准曲线时，应该用Na2CO3 溶液（例如0.5 M）的。
而不是用Tris-HCl或其他溶液。

2.你在实际测定时，反应完后，你的反应液应该用Na2CO3 溶液（例如 1M）与反应液同体积混合，一方面是为了产物的稳定，另一方面是终止了反应。
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【我一直认为做土匪很性感很坏，很直接，可以大声喊：JCMM我爱你！所以，我自从博士毕业后，就一直在寻找黑道大哥一起去抢钱、抢粮、抢地盘】
3楼2012-02-17 11:52:06
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lovezy530520

木虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by HarveyWang at 2012-02-17 11:52:06:
用该法测酶活标准溶液是不是也应该用tris-HCL缓冲液配制？之前用蒸馏水配制的标准溶液做出的标准曲线也资料相符，此次用缓冲液配制的标准溶液最大浓度（10ug/ML）的吸光度只有0.167（410处），请各位大牛给予指导 ...

你好~这个问题已解决了~是因为P-NP未完全溶解~浓度不对~我看文献上大家在配底物溶液时都用的Tris-HCl缓冲溶液~但不知道标准溶液用什么~
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4楼2012-02-17 16:56:10
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HarveyWang

捐助贵宾 (知名作家)

海外行者
引用回帖:
4楼: Originally posted by lovezy530520 at 2012-02-17 16:56:10:
你好~这个问题已解决了~是因为P-NP未完全溶解~浓度不对~我看文献上大家在配底物溶液时都用的Tris-HCl缓冲溶液~但不知道标准溶液用什么~

好好看看上面我说的内容！
不想再重复第二遍。
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【我一直认为做土匪很性感很坏，很直接，可以大声喊：JCMM我爱你！所以，我自从博士毕业后，就一直在寻找黑道大哥一起去抢钱、抢粮、抢地盘】
5楼2012-02-17 17:56:52
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崛起11

铁虫 (初入文坛)
我在用p-NPP法测脂肪酶活性时，做对硝基苯酚标准曲线时用的是乙腈作溶剂，配制了0.1mol/L的溶液，稀释至1mmol/L，用紫外分光光度计扫描出对硝基苯酚的最大吸收峰值是在306nm处的，这与文献中的412nm是不相符的，我想知道这是为什么呢？有哪位大侠帮着分析一下原因。。。。
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水利万物而不争
6楼2012-08-29 20:35:33
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唐雪-

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by HarveyWang at 2012-02-17 11:52:06
用该法测酶活标准溶液是不是也应该用tris-HCL缓冲液配制？之前用蒸馏水配制的标准溶液做出的标准曲线也资料相符，此次用缓冲液配制的标准溶液最大浓度（10ug/ML）的吸光度只有0.167（410处），请各位大牛给予指导， ...

你好 请问可否加你 扣扣 有些问题想像你请教哈 谢谢 十分感谢
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7楼2014-04-09 10:04:49
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447451204

新虫 (初入文坛)
请问最后用那个做的标准曲线，我也遇到了一样的问题。用蒸馏水配制个文献一致，用缓冲溶液就不一样

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8楼2018-05-18 12:52:47
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zyh0822

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by lovezy530520 at 2012-02-17 16:56:10
你好~这个问题已解决了~是因为P-NP未完全溶解~浓度不对~我看文献上大家在配底物溶液时都用的Tris-HCl缓冲溶液~但不知道标准溶液用什么~...

底物PNPP是怎么溶解的啊
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9楼2018-07-14 20:37:54
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燕渴高飞

金虫 (小有名气)
引用回帖:
9楼: Originally posted by zyh0822 at 2018-07-14 20:37:54
底物PNPP是怎么溶解的啊...

请问p-NPP是怎么溶解的啊？？
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10楼2020-08-13 10:04:44
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