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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】滴定法测脂肪酶活性
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lhj_890

金虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】滴定法测脂肪酶活性 已有11人参与

滴定法测脂肪酶活时空白组与实验组所用的碱液的体积相差多少呢？用酚酞做指示剂好呢，还是用Ph计做指示终点好呢？
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1楼 2010-10-13 10:44:17
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yuyan225

金虫 (小有名气)
★ ★ ★
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1949stone(金币+2):谢谢分享经验 2010-10-13 13:05:09
以前做过这个，空白组于实验组的碱液体积多少由脂肪酶酶活而定，指示剂我用的是酚酞~~
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2楼2010-10-13 11:20:56
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lhj_890

金虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by yuyan225 at 2010-10-13 11:20:56:
以前做过这个，空白组于实验组的碱液体积多少由脂肪酶酶活而定，指示剂我用的是酚酞~~

我买的脂肪酶活是大于等于3000的，而我所测得才几十，很郁闷！我想请教一下测定方法中的稀释倍数是怎么计算的呢？
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3楼2010-10-13 14:34:59
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yuyan225

金虫 (小有名气)
★
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lhj_890(金币+1):谢谢分享 2010-10-14 15:25:28
引用回帖:
Originally posted by lhj_890 at 2010-10-13 14:34:59:

我买的脂肪酶活是大于等于3000的，而我所测得才几十，很郁闷！我想请教一下测定方法中的稀释倍数是怎么计算的呢？

你看看是不是你的碱液浓度太大了，买的酶的话不可能才有几十的酶活吧~~~稀释倍数你可以看一下相关文献，也可以先稀释个1000倍看看
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4楼2010-10-14 09:21:02
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lhj_890

金虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by yuyan225 at 2010-10-14 09:21:02:


你看看是不是你的碱液浓度太大了，买的酶的话不可能才有几十的酶活吧~~~稀释倍数你可以看一下相关文献，也可以先稀释个1000倍看看

谢谢了，呵呵，尝试一下。
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5楼2010-10-14 13:38:50
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biolio2009

木虫 (著名写手)
★
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以PH计测定结果肯定很精密一些；这个酶活的测定国家有标准方法，很适用，一般不会有问题。如果你采用这个方法的还是这个结果的话，有两个原因：一、你的测定有问题；二、你买的产品放置时间过久没有活力了；三、你买的产品上当了（这个可能性很低）
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6楼2012-08-31 10:01:16
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koalarola

新虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
我也曾经出现过类似问题，最后彻查发现，是氢氧化钠溶液在滴定前要稀释。国标上配制的氢氧化钠溶液是母液。还有，同时采用酚酞和pH计对比发现，两种方法均可，但酚酞试剂由于人为主观识别，精确度较pH计的方法低。建议有条件用pH计。

[ Last edited by koalarola on 2012-10-30 at 17:20 ]
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7楼2012-10-30 17:15:53
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离缘

新虫 (初入文坛)
★
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我的实验组跟对照组相差也不大，我用的NaoH浓度为0.025MOl/L，反应时间为10分钟，空白对照组在反应终止后加入酶液
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等等
8楼2012-11-28 16:18:43
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lifming

铁虫 (小有名气)
★
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1.乳化很关键，建议采用细胞破碎仪乳化。
2.建议用ph计滴定终点，客观准确
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9楼2013-06-13 18:00:02
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nmgwwj0629

新虫 (初入文坛)
我们的都要求差2-3ml，这应该跟脂肪酶的稀释倍数有关系。目前用的是酚酞指示剂。
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10楼2014-08-07 14:10:36
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