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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 霉菌脂肪酶活性的测定
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秦川萝卜头

金虫 (小有名气)

[求助] 霉菌脂肪酶活性的测定

大家好，我想请教一下霉菌脂肪酶活性的测定方法，如果是胞内酶应如何测定，采用什么方法破碎细胞。具体该怎么做？谢谢大家！
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只要努力，总会有结果的
1楼 2012-02-02 21:08:48
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gjs713

至尊木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
rainwander(金币+1): 鼓励交流 2012-02-04 16:40:21
我们以前常直接采用全细胞进行测定，通过高温烘干确定菌浓后取一定量菌体的菌液测酶活。如果要破碎细胞的话比较麻烦些，因为真菌难破壁，条件好的话可以用高压匀浆机，没有这个设备的就取一点液氮研磨。
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勤奋、执着、专注，则无坚不破。
2楼2012-02-03 10:55:00
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zxc6884

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
rainwander(金币+1): 鼓励交流 2012-02-04 16:40:27
可以超声破碎，测酶活常用乳化的橄榄油反应系统
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3楼2012-02-03 20:40:53
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秦川萝卜头

金虫 (小有名气)
引用回帖:
楼: Originally posted by gjs713 at 2012-02-03 10:55:00:
我们以前常直接采用全细胞进行测定，通过高温烘干确定菌浓后取一定量菌体的菌液测酶活。如果要破碎细胞的话比较麻烦些，因为真菌难破壁，条件好的话可以用高压匀浆机，没有这个设备的就取一点液氮研磨。

为什么要用液氮研磨？用普通的研磨在冰浴下研磨不行吗？什么是全细胞测定？指的是胞外酶的测定吗
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只要努力，总会有结果的
4楼2012-02-04 10:22:06
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秦川萝卜头

金虫 (小有名气)
引用回帖:
楼: Originally posted by zxc6884 at 2012-02-03 20:40:53:
可以超声破碎，测酶活常用乳化的橄榄油反应系统

霉菌如果采用超声破碎，破碎功率一般得多少啊？谢谢！
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只要努力，总会有结果的
5楼2012-02-04 10:23:00
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gjs713

至尊木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★
rainwander(金币+1): 鼓励交流 2012-02-04 16:40:36
引用回帖:
4楼: Originally posted by 秦川萝卜头 at 2012-02-04 10:22:06:
为什么要用液氮研磨？用普通的研磨在冰浴下研磨不行吗？什么是全细胞测定？指的是胞外酶的测定吗

液氮效果更好，如果没有液氮当然冰浴也凑合。
全细胞测定是指 采用全细胞作为催化剂测定酶活，不需要破碎直接测定，把菌体量确定就行，但是这个方法稍微有些粗放
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勤奋、执着、专注，则无坚不破。
6楼2012-02-04 14:58:22
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秦川萝卜头

金虫 (小有名气)
引用回帖:
楼: Originally posted by gjs713 at 2012-02-04 14:58:22:
液氮效果更好，如果没有液氮当然冰浴也凑合。
全细胞测定是指 采用全细胞作为催化剂测定酶活，不需要破碎直接测定，把菌体量确定就行，但是这个方法稍微有些粗放

您用P-NPP法侧过脂肪酶活性酶？谢谢
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只要努力，总会有结果的
7楼2012-02-04 15:17:04
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gjs713

至尊木虫 (职业作家)
引用回帖:
7楼: Originally posted by 秦川萝卜头 at 2012-02-04 15:17:04:
您用P-NPP法侧过脂肪酶活性酶？谢谢

脂肪酶活性没测过。只测过其他酶的，采用全细胞测定的非常多，不知道是否有共性
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勤奋、执着、专注，则无坚不破。
8楼2012-02-04 15:19:24
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秦川萝卜头

金虫 (小有名气)
引用回帖:
楼: Originally posted by gjs713 at 2012-02-04 15:19:24:
脂肪酶活性没测过。只测过其他酶的，采用全细胞测定的非常多，不知道是否有共性

好的  谢谢
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只要努力，总会有结果的
9楼2012-02-05 09:48:03
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zxc6884

铁杆木虫 (著名写手)
★ ★ ★ ★ ★
scelab(金币+5): 鼓励新虫，谢谢交流哦~~~ 2012-02-05 21:18:22
引用回帖:
5楼: Originally posted by 秦川萝卜头 at 2012-02-04 10:23:00:
霉菌如果采用超声破碎，破碎功率一般得多少啊？谢谢！

可以把菌清洗一两次，离心下来冻融一次，然后超声破碎，功率可以500w，时间3s，100次，破碎后可以SDS-PAGE鉴定上清沉淀蛋白，如果有些条带只有上清中有，沉淀很少，说明破碎比较完全了.有时间超声条件最好摸索下，和菌的类型，浓度关系很大的。
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10楼2012-02-05 20:27:30
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