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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 碘量法测定淀粉酶活性的问题
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liouwzh

木虫 (正式写手)

[求助] 碘量法测定淀粉酶活性的问题

做细菌淀粉酶活性测定时，发酵上清液与0.5%的可溶性淀粉在55摄氏度反应10min后加入硫酸终止反应。取0.5ml反应液与5ml稀碘液显色，在OD620处测光密度。但是发现有几个样品的OD值竟然比未添加酶液的空白对照的样品的OD值，想不通是什么原因。
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1楼 2011-09-22 16:40:42
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魏小勇2011

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

你应该说清楚点啊，这叫人如何帮你？？
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学习学习
2楼2011-09-22 21:17:18
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liouwzh

木虫 (正式写手)
不好意思，落了几个字。
做细菌淀粉酶活性测定时，发酵上清液与0.5%的可溶性淀粉在55摄氏度反应10min后加入硫酸终止反应。取0.5ml反应液与5ml稀碘液显色，在OD620处测光密度。但是发现有几个样品的OD值竟然比未添加酶液的空白对照的样品的OD值高，这是否是说明淀粉并没有被酶解反而淀粉含量增加了还是说有其他原因？
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3楼2011-09-23 10:17:43
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魏小勇2011

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★
liouwzh(金币+2): 多谢 2011-09-23 14:17:40
rainwander(金币+1): 鼓励交流 2011-09-25 20:07:53
首先要确定碘液是否摇匀，还有就是操作错误？再有就是光波长，我看到的资料怎么是在660nm下测吸光度的。。。希望对你有帮助。。谢谢！
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学习学习
4楼2011-09-23 12:11:38
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liouwzh

木虫 (正式写手)
已经排除了实验操作的问题，多次重复都是这一结果，可能是跟酶有关，胞外酶液中含有环糊精葡萄糖苷转移酶是否会造成这一现象？
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5楼2011-09-23 14:17:23
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laokuang1988

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

liouwzh(金币+2): 多谢 2011-09-25 11:22:14
空白对照多做几个，有很大差别，淀粉溶解要透，要呈透明。
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6楼2011-09-24 17:18:25
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liouwzh

木虫 (正式写手)
应该跟空白对照没有多大关系，因为测定的样品比空白对照高出非常多，空白OD为1.2左右，而测定样品的OD则为2.5左右，有时甚至超出量程。多次试验都是类似结果。
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7楼2011-09-25 11:24:32
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muzi163

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
liouwzh(金币+2): ★有帮助 2012-01-08 12:17:16
可能是你配制的碘液浓度太高，把碘液再稀释一下试试吧！
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会莫名其妙地找不到一个人，久而久之也就习惯了他不在。
8楼2012-01-05 10:38:56
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wuyuan1992

金虫 (正式写手)
我最近在做碘法测定淀粉酶的活力，也是出现了类似的状况，匪夷所思。空白的OD值最低，对照的次之，反应的最高。跟原本想象中结果完全相反，非常困惑。不知道楼主有没有弄清楚究竟是什么原因，可不可以分享交流一下。
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非淡泊无以明志，非宁静无以致远。
9楼2012-04-27 00:28:47
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wuyuan1992

金虫 (正式写手)
楼主，交流万岁呀～
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非淡泊无以明志，非宁静无以致远。
10楼2012-04-27 18:26:50
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