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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 专业学科区 » 食品 » 果蔬 » 关于测定笋的多酚氧化酶PPO活性的问题
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大米小麦

新虫 (初入文坛)

[求助] 关于测定笋的多酚氧化酶PPO活性的问题

测定绿竹笋 的PPO活性时得到的数值都是负值，到底是哪里出了问题？谁测过这个指标啊？结果如何？能不能把步骤写一下啊？
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1楼 2011-08-15 17:40:30
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

zhouqi0982

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
树树8013(金币+1): 谢谢zhouqi0982虫友参与交流。 2011-08-16 23:17:00
sweety: 回帖置顶 2011-12-30 09:23:33
测定PPO活性时倒没出现这种问题，不知道楼主采用的是什么。
称取5g雷竹笋，置于研钵中，加入5mL提取缓冲液（含4% PVP、1 mmol/L PEG，1% Triton X-100），在冰浴条件下研磨成匀浆，四层纱布过滤后，4℃、12000r/min离心20min，上清液，即为粗酶液。配制反应体系，包括：l mL 0.05mol/L的邻二苯酚，4 mL 0.05mol/L、pH 5.5乙酸-乙酸钠缓冲液。以蒸馏水为参比，加入0.1 mL酶液，在反应的15 s开始计记录反应体系在420 nm的OD值，作为初始值，每隔1 min记录一次，连续测定至少六组。
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生活有朝气，活得畅畅快快，工作讲求效率，做得踏踏实实！
2楼2011-08-16 09:11:07
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zhouqi0982

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

树树8013(食品EPI+1): 谢谢用心解答，奖励EPI一枚。 2011-08-20 01:55:10
大米小麦(金币+5): 2011-08-29 17:56:18
sweety: 回帖置顶 2011-12-30 09:23:41
楼主的测定方法和我的有些不同，不过就我个人提出几点看法。第一，离心的时候应该采取的冷冻离心，因为测定的是酶活，对结果可能有一定的影响，确保结果的的准确性，采取冷冻离心比较好。第二，吸光度值不一定都是产生有色物质来测定的，有的是产生的一些物质，但这些物质的吸光性是不一样的，在测定PPO这个实验中，颜色变化不是很明显，但OD值是有变化的（就我的实验步骤而言的）；第三；儿茶酚溶液应该采用缓冲液配置的；第三，至于测定时负值得原因，不太明确，可以给楼主提出几个建议，楼主可以去试试，PPO活性测定中，OD值有变化，但不会太大，楼主可以试试把酶液的浓度提高些，离心时间延长些，吸取上清液测定的时候，一定不能吸出悬浮物，另外再把比色皿好好清洗下，看能不能找出些原因。
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5楼2011-08-19 08:38:50
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普通回帖

mixi113

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

这也是正常现象，不过，根据实验结果测量值是越来越大的，可以判断其ppo具有活性。
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世上无事，何须自扰
3楼2011-08-16 09:35:57
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大米小麦

新虫 (初入文坛)
试验步骤：3g笋+2.5ml0.05mol/L磷酸缓冲液，冰浴研磨，7.5ml缓冲液洗研钵，共10ml。3000R离心10min，上清液为酶液，冷藏。
3.9ml0.05mol/L缓冲液+1ml焦儿茶酚+1ml酶液（对照用煮过的），37℃保温10分钟，冰浴，加2ml20%三氯乙酸，5000R离心10min，525nm测吸光度值。
问题是：
1、吸光度值不是靠生成有色物质来测量吗？为什么试验到后来就成透明无色的了？
2、儿茶酚是用缓冲液配置还是用蒸馏水？
3、为什么我测定的都是负值？
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4楼2011-08-16 15:13:39
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大米小麦

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
5楼: Originally posted by zhouqi0982 at 2011-08-19 08:38:50:
楼主的测定方法和我的有些不同，不过就我个人提出几点看法。第一，离心的时候应该采取的冷冻离心，因为测定的是酶活，对结果可能有一定的影响，确保结果的的准确性，采取冷冻离心比较好。第二，吸光度值不一定都是 ...

可否把你的过程写一下？
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6楼2011-08-22 14:56:34
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zhouqi0982

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
6楼: Originally posted by 大米小麦 at 2011-08-22 14:56:34:
可否把你的过程写一下？

第一次应助时就是的了
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7楼2011-08-29 16:33:58
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zhouxj

至尊木虫 (文坛精英)
对照由问题
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8楼2011-09-01 21:24:45
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zhuyinyin

金虫 (小有名气)
是不是需要冰水浴
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9楼2011-09-25 15:28:48
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tongyan_88

铁虫 (小有名气)
★ ★
树树8013(金币+2): 欢迎tongyan交流讨论，常来~ 2011-11-09 08:15:05
我提几点建议：一、温度要合适，要用冷冻离心机二、你可以做一个酶活性的变化趋势，然后再去计算。三、做下紫外扫描，看看是竹笋的酶的最大吸收波长是在420nm处
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10楼2011-11-07 16:26:29
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