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大米小麦

新虫 (初入文坛)

[求助] 关于测定笋的多酚氧化酶PPO活性的问题

测定绿竹笋 的PPO活性时得到的数值都是负值,到底是哪里出了问题?谁测过这个指标啊?结果如何?能不能把步骤写一下啊?
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mixi113

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

这也是正常现象,不过,根据实验结果测量值是越来越大的,可以判断其ppo具有活性。
世上无事,何须自扰
3楼2011-08-16 09:35:57
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zhouqi0982

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


树树8013(金币+1): 谢谢zhouqi0982虫友参与交流。 2011-08-16 23:17:00
sweety: 回帖置顶 2011-12-30 09:23:33
测定PPO活性时倒没出现这种问题,不知道楼主采用的是什么。
称取5g雷竹笋,置于研钵中,加入5mL提取缓冲液(含4% PVP、1 mmol/L PEG,1% Triton X-100),在冰浴条件下研磨成匀浆,四层纱布过滤后,4℃、12000r/min离心20min,上清液,即为粗酶液。配制反应体系,包括:l mL 0.05mol/L的邻二苯酚,4 mL 0.05mol/L、pH 5.5乙酸-乙酸钠缓冲液。以蒸馏水为参比,加入0.1 mL酶液,在反应的15 s开始计记录反应体系在420 nm的OD值,作为初始值,每隔1 min记录一次,连续测定至少六组。
生活有朝气,活得畅畅快快,工作讲求效率,做得踏踏实实!
2楼2011-08-16 09:11:07
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大米小麦

新虫 (初入文坛)

试验步骤:3g笋+2.5ml0.05mol/L磷酸缓冲液,冰浴研磨,7.5ml缓冲液洗研钵,共10ml。3000R离心10min,上清液为酶液,冷藏。
3.9ml0.05mol/L缓冲液+1ml焦儿茶酚+1ml酶液(对照用煮过的),37℃保温10分钟,冰浴,加2ml20%三氯乙酸,5000R离心10min,525nm测吸光度值。
问题是:
1、吸光度值不是靠生成有色物质来测量吗?为什么试验到后来就成透明无色的了?
2、儿茶酚是用缓冲液配置还是用蒸馏水?
3、为什么我测定的都是负值?
4楼2011-08-16 15:13:39
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zhouqi0982

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

树树8013(食品EPI+1): 谢谢用心解答,奖励EPI一枚。 2011-08-20 01:55:10
大米小麦(金币+5): 2011-08-29 17:56:18
sweety: 回帖置顶 2011-12-30 09:23:41
楼主的测定方法和我的有些不同,不过就我个人提出几点看法。第一,离心的时候应该采取的冷冻离心,因为测定的是酶活,对结果可能有一定的影响,确保结果的的准确性,采取冷冻离心比较好。第二,吸光度值不一定都是产生有色物质来测定的,有的是产生的一些物质,但这些物质的吸光性是不一样的,在测定PPO这个实验中,颜色变化不是很明显,但OD值是有变化的(就我的实验步骤而言的);第三;儿茶酚溶液应该采用缓冲液配置的;第三,至于测定时负值得原因,不太明确,可以给楼主提出几个建议,楼主可以去试试,PPO活性测定中,OD值有变化,但不会太大,楼主可以试试把酶液的浓度提高些,离心时间延长些,吸取上清液测定的时候,一定不能吸出悬浮物,另外再把比色皿好好清洗下,看能不能找出些原因。
生活有朝气,活得畅畅快快,工作讲求效率,做得踏踏实实!
5楼2011-08-19 08:38:50
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