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大米小麦

新虫 (初入文坛)

[求助] 关于测定笋的多酚氧化酶PPO活性的问题

测定绿竹笋 的PPO活性时得到的数值都是负值,到底是哪里出了问题?谁测过这个指标啊?结果如何?能不能把步骤写一下啊?
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tongyan_88

铁虫 (小有名气)

★ ★
树树8013(金币+2): 欢迎tongyan交流讨论,常来~ 2011-11-09 08:15:05
我提几点建议:一、温度要合适,要用冷冻离心机二、你可以做一个酶活性的变化趋势,然后再去计算。三、做下紫外扫描,看看是竹笋的酶的最大吸收波长是在420nm处
10楼2011-11-07 16:26:29
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zhouqi0982

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


树树8013(金币+1): 谢谢zhouqi0982虫友参与交流。 2011-08-16 23:17:00
sweety: 回帖置顶 2011-12-30 09:23:33
测定PPO活性时倒没出现这种问题,不知道楼主采用的是什么。
称取5g雷竹笋,置于研钵中,加入5mL提取缓冲液(含4% PVP、1 mmol/L PEG,1% Triton X-100),在冰浴条件下研磨成匀浆,四层纱布过滤后,4℃、12000r/min离心20min,上清液,即为粗酶液。配制反应体系,包括:l mL 0.05mol/L的邻二苯酚,4 mL 0.05mol/L、pH 5.5乙酸-乙酸钠缓冲液。以蒸馏水为参比,加入0.1 mL酶液,在反应的15 s开始计记录反应体系在420 nm的OD值,作为初始值,每隔1 min记录一次,连续测定至少六组。
生活有朝气,活得畅畅快快,工作讲求效率,做得踏踏实实!
2楼2011-08-16 09:11:07
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mixi113

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

这也是正常现象,不过,根据实验结果测量值是越来越大的,可以判断其ppo具有活性。
世上无事,何须自扰
3楼2011-08-16 09:35:57
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大米小麦

新虫 (初入文坛)

试验步骤:3g笋+2.5ml0.05mol/L磷酸缓冲液,冰浴研磨,7.5ml缓冲液洗研钵,共10ml。3000R离心10min,上清液为酶液,冷藏。
3.9ml0.05mol/L缓冲液+1ml焦儿茶酚+1ml酶液(对照用煮过的),37℃保温10分钟,冰浴,加2ml20%三氯乙酸,5000R离心10min,525nm测吸光度值。
问题是:
1、吸光度值不是靠生成有色物质来测量吗?为什么试验到后来就成透明无色的了?
2、儿茶酚是用缓冲液配置还是用蒸馏水?
3、为什么我测定的都是负值?
4楼2011-08-16 15:13:39
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