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raulwen2002木虫 (小有名气)
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【求助/交流】微生物纤维素酶活测定 已有7人参与
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| 请教各位大侠一个问题，本人目前在做纤维素降解菌对木薯渣的降解效果。使用的菌是从菌种保藏中心购买的高效纤维素降解菌，采用的方法是DNS显色，用分光光度计测定CMC酶活和滤纸酶活时，失活酶的测定值却高于酶酶解反应后的值，请问谁知道可能是什么原因啊？谢谢啦！ |
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 生工检测理论与实务 |
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scelab(金币+3):欢迎多来交流！:tiger06: 2010-05-14 21:13:47
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raulwen2002(金币+1): 2010-05-16 20:53:17
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目前通常以羧甲基纤维素钠盐（简称CMCNa）作为纤维素酶作用的底物。但需要指出的是CMCNa无论在结构上还是在性质上都不同于天然纤维素，天然纤维素不溶于水，而CMCNa有很强的亲水性，非常容易被纤维素酶分解。在相同条件下，同一种纤维素酶分解CMCNa所产生的还原糖远大于水解天然纤维素所产生的还原糖。 纤维素酶水解羧甲基纤维素钠（CMCNa,[C6H9O5 (CH2COONa)]n）释放的羧甲基还原糖，与碱性条件下的DNS试剂发生反应，生成红棕色的氨基化合物，该化合物在540nm下有最大光吸收，由此，可根据测得的吸光值与葡萄糖浓度的关系来计算纤维素酶的活力（CMCA）。 [ Last edited by muchong5577 on 2010-5-14 at 20:21 ] |
6楼2010-05-14 20:19:12
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scelab(金币+2):热心虫友，欢迎多来交流~~~:tiger06::tiger28::tiger23: 2010-05-15 00:56:07
scelab(金币+2):热心虫友，欢迎多来交流~~~:tiger06::tiger28::tiger23: 2010-05-15 00:56:07
| 纤维素酶是一种多组分酶，包括C1酶、CX酶和β-葡萄糖苷酶三种主要组分。其中C1酶的作用是将天然纤维素水解成无定形纤维素，CX酶的作用是将无定形纤维素继续水解成纤维寡糖，β-葡萄糖苷酶的作用是将纤维寡糖水解成葡萄糖。纤维素酶水解纤维素产生的纤维二糖、葡萄糖等还原糖能将碱性条件下的3,5-二硝基水杨酸（DNS）还原，生成棕红色的氨基化合物，在540nm波长处有最大光吸收，在一定范围内还原糖的量与反应液的颜色强度呈比例关系，利用比色法测定其还原糖生成的量就可测定纤维素酶的活力。 |
7楼2010-05-14 21:25:53
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9楼2010-05-15 23:00:03
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