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raulwen2002

木虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】微生物纤维素酶活测定 已有7人参与

请教各位大侠一个问题,本人目前在做纤维素降解菌对木薯渣的降解效果。使用的菌是从菌种保藏中心购买的高效纤维素降解菌,采用的方法是DNS显色,用分光光度计测定CMC酶活和滤纸酶活时,失活酶的测定值却高于酶酶解反应后的值,请问谁知道可能是什么原因啊?谢谢啦!
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muchong5577

金虫 (正式写手)

★ ★ ★
scelab(金币+3):欢迎多来交流!:tiger06: 2010-05-14 21:13:47
raulwen2002(金币+1): 2010-05-16 20:53:17
目前通常以羧甲基纤维素钠盐(简称CMCNa)作为纤维素酶作用的底物。但需要指出的是CMCNa无论在结构上还是在性质上都不同于天然纤维素,天然纤维素不溶于水,而CMCNa有很强的亲水性,非常容易被纤维素酶分解。在相同条件下,同一种纤维素酶分解CMCNa所产生的还原糖远大于水解天然纤维素所产生的还原糖。     
        纤维素酶水解羧甲基纤维素钠(CMCNa,[C6H9O5 (CH2COONa)]n)释放的羧甲基还原糖,与碱性条件下的DNS试剂发生反应,生成红棕色的氨基化合物,该化合物在540nm下有最大光吸收,由此,可根据测得的吸光值与葡萄糖浓度的关系来计算纤维素酶的活力(CMCA)。

[ Last edited by muchong5577 on 2010-5-14 at 20:21 ]
6楼2010-05-14 20:19:12
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墨香若水

木虫 (著名写手)

小小囧虫


1949stone(金币+1):谢谢 2010-05-14 13:25:43
你的产物里面含有还原性糖,失活酶的测定值应该是这个原因。
仕不可不弘毅,任重而道远
2楼2010-05-13 15:08:04
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zhjp326

铁杆木虫 (正式写手)

★ ★
1949stone(金币+2):信息交流经验 2010-05-14 13:25:54
测还原糖的方法很多的,找一个灵敏的试试,比如铁氰化钾法,或者其他方法,可能会有用,DNS法灵敏度不够高,不过它操作简单方便,所以大家都用。
3楼2010-05-13 16:50:00
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raulwen2002

木虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by 墨香若水 at 2010-05-13 15:08:04:
你的产物里面含有还原性糖,失活酶的测定值应该是这个原因。

但没有失活的酶液里也有还原性糖啊,因为酶液都是一样的,只是存在失活和不失活的区别,怎么会出现失活酶的吸光度要高于没有失活酶的吸光度呢
4楼2010-05-14 09:47:07
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