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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】微生物纤维素酶活测定
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raulwen2002

木虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】微生物纤维素酶活测定 已有7人参与

请教各位大侠一个问题，本人目前在做纤维素降解菌对木薯渣的降解效果。使用的菌是从菌种保藏中心购买的高效纤维素降解菌，采用的方法是DNS显色，用分光光度计测定CMC酶活和滤纸酶活时，失活酶的测定值却高于酶酶解反应后的值，请问谁知道可能是什么原因啊？谢谢啦！
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1楼 2010-05-13 12:13:00
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muchong5577

金虫 (正式写手)
★ ★ ★
scelab(金币+3):欢迎多来交流！:tiger06: 2010-05-14 21:13:47
raulwen2002(金币+1): 2010-05-16 20:53:17
目前通常以羧甲基纤维素钠盐（简称CMCNa）作为纤维素酶作用的底物。但需要指出的是CMCNa无论在结构上还是在性质上都不同于天然纤维素，天然纤维素不溶于水，而CMCNa有很强的亲水性，非常容易被纤维素酶分解。在相同条件下，同一种纤维素酶分解CMCNa所产生的还原糖远大于水解天然纤维素所产生的还原糖。     
        纤维素酶水解羧甲基纤维素钠（CMCNa,[C6H9O5 (CH2COONa)]n）释放的羧甲基还原糖，与碱性条件下的DNS试剂发生反应，生成红棕色的氨基化合物，该化合物在540nm下有最大光吸收，由此，可根据测得的吸光值与葡萄糖浓度的关系来计算纤维素酶的活力（CMCA）。

[ Last edited by muchong5577 on 2010-5-14 at 20:21 ]
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6楼2010-05-14 20:19:12
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墨香若水

木虫 (著名写手)

小小囧虫
★
1949stone(金币+1):谢谢 2010-05-14 13:25:43
你的产物里面含有还原性糖，失活酶的测定值应该是这个原因。
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仕不可不弘毅，任重而道远
2楼2010-05-13 15:08:04
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zhjp326

铁杆木虫 (正式写手)
★ ★
1949stone(金币+2):信息交流经验 2010-05-14 13:25:54
测还原糖的方法很多的，找一个灵敏的试试，比如铁氰化钾法，或者其他方法，可能会有用，DNS法灵敏度不够高，不过它操作简单方便，所以大家都用。
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3楼2010-05-13 16:50:00
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raulwen2002

木虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by 墨香若水 at 2010-05-13 15:08:04:
你的产物里面含有还原性糖，失活酶的测定值应该是这个原因。

但没有失活的酶液里也有还原性糖啊，因为酶液都是一样的，只是存在失活和不失活的区别，怎么会出现失活酶的吸光度要高于没有失活酶的吸光度呢
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4楼2010-05-14 09:47:07
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