我做的是拟南芥纯和鉴定，每个孔用的引物都是RP和LBb1.3，各0.5ul。我的pcr条带一直不亮，不清楚为什么。前6个孔的样品是同一品种的拟南芥，只是DNA浓度不同，1,3,5的浓度约400ngul，2,4,6的浓度约为1100ng/ul。我这次是想看dNTP浓度多少合适，所以第1,2孔的dNTP是0.5ul，3,4孔的是1.0ul，5,6孔的是1.5ul。第7孔加的是col，dNTP 1ul。体系是25ul，10×buffer 2.5ul，pfu酶：0.1ul，模板1ul，水 21ul，引物共1ul。pcr：94℃:3min；94℃:30s,56℃:30s,72℃:1min,30个循环;72℃:5min;16℃:5min.请大侠解答为什么我的条带不亮，是引物加多了吗？但是1,3,5孔没有形成引物二聚体的为什么条带也不亮？
![拟南芥pcr图分析]()
2013.9.20.gif |
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