24小时热门版块排行榜    

查看: 1055  |  回复: 4

liwenwhpu

新虫 (初入文坛)

[求助] 拟南芥pcr图分析

我做的是拟南芥纯和鉴定,每个孔用的引物都是RP和LBb1.3,各0.5ul。我的pcr条带一直不亮,不清楚为什么。前6个孔的样品是同一品种的拟南芥,只是DNA浓度不同,1,3,5的浓度约400ngul,2,4,6的浓度约为1100ng/ul。我这次是想看dNTP浓度多少合适,所以第1,2孔的dNTP是0.5ul,3,4孔的是1.0ul,5,6孔的是1.5ul。第7孔加的是col,dNTP 1ul。体系是25ul,10×buffer 2.5ul,pfu酶:0.1ul,模板1ul,水 21ul,引物共1ul。pcr:94℃:3min;94℃:30s,56℃:30s,72℃:1min,30个循环;72℃:5min;16℃:5min.请大侠解答为什么我的条带不亮,是引物加多了吗?但是1,3,5孔没有形成引物二聚体的为什么条带也不亮?
拟南芥pcr图分析
2013.9.20.gif
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

liwenwhpu

新虫 (初入文坛)

?没人回答?
2楼2013-09-21 18:01:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

匿名

用户注销 (著名写手)

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
kx444555: 金币+5, 鼓励交流 2013-09-21 22:24:55
本帖仅楼主可见
3楼2013-09-21 19:10:49
已阅   申请MolEPI   回复此楼   编辑   查看我的主页

匿名

用户注销 (著名写手)

★ ★
kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2013-09-21 22:24:59
本帖仅楼主可见
4楼2013-09-21 19:13:46
已阅   申请MolEPI   回复此楼   编辑   查看我的主页

liwenwhpu

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
3楼: Originally posted by 彬心玉壶 at 2013-09-21 19:10:49
温馨提示:
1、如果你是“拟南芥纯和鉴定”,先搞定出一点,你的重点是鉴定,带亮不亮不重要,重要的是有没有目的带?这就够了。(如果想在最终确定的话,切胶送测序就好了)。你不是做什么PCR检测试剂盒,我个人觉 ...

首先谢谢你的回答。2,4,6的亮度应该是引物的,我的目标片段的900bp左右。marker在我这边看还可以,应该是照片没调好,凝胶成像仪不是特别清楚。用pfu酶的是因为实验室一直都是用这个酶,不过我下午可以试一试用taq酶。
5楼2013-09-22 12:13:24
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 liwenwhpu 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 2026年国自然面上资助率 +15 布布和一二 2026-07-30 19/950 2026-08-01 15:18 by 40862026
[基金申请] 面上再次挂了,太难了,躺也躺不了,倦也卷不过,小学校之殇! +15 低垂的野花 2026-07-31 20/1000 2026-08-01 14:10 by gltch
[博后之家] 售SCI一区T0P文章,我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +3 jzg3xk1po8 2026-07-31 8/400 2026-08-01 13:53 by y4XuShGyllvT
[考博] 售SCI-T0P文章,我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 jzg3xk1po8 2026-07-31 10/500 2026-08-01 13:51 by y4XuShGyllvT
[基金申请] 售SCI一区文章,我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +3 jzg3xk1po8 2026-07-31 10/500 2026-08-01 13:51 by y4XuShGyllvT
[教师之家] 售SCI一区T0P文章,我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +3 jzg3xk1po8 2026-07-31 7/350 2026-08-01 13:49 by y4XuShGyllvT
[基金申请] 微信指数没变化,科研之友没阅读 +14 wangze12014 2026-07-28 18/900 2026-07-31 18:35 by lzchaihuo
[教师之家] 基础研究怎么拉横向,学校到款任务越来越多,难以完成 拉横向,都有哪些途径啊 +8 锦衣卫寒战 2026-07-28 8/400 2026-07-31 18:13 by beefly
[高分子] HXDI做水性聚氨酯乳液,是不是特别容易出渣 15+3 yuyusuv 2026-07-29 3/150 2026-07-31 09:21 by huizingga
[基金申请] 系统今天又提示维护了,估计离放榜不远了 +11 winnerche 2026-07-29 15/750 2026-07-30 23:08 by jnhyjjm
[考博] 申请2027年材料/化学类博士 10+3 考研老狗? 2026-07-25 5/250 2026-07-30 19:33 by 白色木鱼
[基金申请] 你们的时间戳变了吗 +3 archvillain 2026-07-30 4/200 2026-07-30 18:53 by levinzhwen
[基金申请] 今年的WR进展到哪一步了? +5 wsgjhwz 2026-07-25 9/450 2026-07-30 12:59 by 可淡不可忘
[有机交流] 产物和副产物价值比较 30+4 小汤02 2026-07-27 5/250 2026-07-30 12:44 by czyzsu
[基金申请] 时间戳他又来了 +14 晓晓爱翠翠 2026-07-26 17/850 2026-07-29 16:30 by 呵呵二哥
[有机交流] 这个自发加氧反应的机理是什么? 50+4 YUAN2273 2026-07-25 7/350 2026-07-29 12:27 by xiaobenpu
[基金申请] 这种情况还有戏吗 +5 drbart 2026-07-27 11/550 2026-07-29 05:50 by drbart
[基金申请] 同事接到电话了,我却没有 +4 1234567wang 2026-07-27 4/200 2026-07-28 10:11 by GOODLUCKER
[基金申请] 准备明年的基金了 +5 Tide man 2026-07-27 5/250 2026-07-28 09:25 by newfuzzy1
[分析] 水蒸气蒸馏法乳化现象 +3 月光娇娇 2026-07-26 3/150 2026-07-26 23:25 by caiyun
信息提示
请填处理意见