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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 求助解读PCR图为什么会这么烂
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渭水凡夫

铁虫 (小有名气)

[求助] 求助解读PCR图为什么会这么烂

之前做的都挺不错挺稳定的 回了半个月的家  之后就做不出来了 所有的东西都换新的试了还是不行啊  ，，，，求大侠指点迷津   
体系25ul
buffer  2.5    Dntp  2    F  0.3   R  0.3   模板 0.5 酶  0.5  水补至25ul
求助解读PCR图为什么会这么烂
求指点迷津
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平静的水和不叫的狗是最可怕的
1楼 2013-09-18 00:01:31
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deeplycat

新虫 (初入文坛)
★ ★
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2013-09-19 13:47:17
我觉得是你的PCR程序，退火温度设置的太低，你的退火温度一般是你的Tm值减少1--3度（生工），我P的时候就是  退火温度设置的低了 结果条带就弥散了。
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8楼2013-09-18 20:33:44
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yuren2009

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2013-09-18 10:22:24
我感觉你的引物有问题，确定是新的？还有就是你的DNA质量不确定。

[ 发自小木虫客户端 ]
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学习使你立于不败之地
2楼2013-09-18 00:58:19
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chlorella409

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
引物不好，基本没P出来，都是弥散的
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3楼2013-09-18 08:57:12
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Sthunder

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+1, 鼓励回帖交流！ 2013-09-18 10:22:34
个人觉得模板不行，同时退火温度可能有点高！Good luck！
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互助互励，共奋共进！！
4楼2013-09-18 09:34:46
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