应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 荧光定量PCR
北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
51/1返回列表
查看: 1152  |  回复: 7
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

浅笑包包

新虫 (小有名气)

[求助] 荧光定量PCR

荧光定量PCR的引物可以用来做一般的PCR吗？最近要做荧光定量，设计了荧光定量的引物，先提取RNA, 然后反转录成cDNA,就用荧光定量的引物来做一般的PCR,扩增一个基因，还做了一个不加模板的阴性对照，跑胶后发现对照与实验组的条带一样，可能是发生了引物二聚体的现象，是引物出问题了吗?不能用荧光定量的引物做一般的PCR,但是我导师说可以，求证？？、
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
Be the change you want to see in the world.
1楼 2013-09-14 13:11:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hl16010921

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
浅笑包包: 金币+5, ★★★很有帮助, 三克油~受教啦~~ 2013-09-18 07:48:38
1.可以。扩增条件可以和定量相同。实际上有时为了省荧光染料，在摸realtimePCR条件时我们常常用realtime的引物用普通PCR摸条件。2.一般荧光定量引物的二聚体是最少的。因为realtimePCR要严格控制二聚体。3.阴性对照出结果，可能是出现了污染。二聚体和目的条带从电泳上一般能分辨出来。二聚体都低于100bp，亮度大，有弥散。realtimePCR的目的序列一般都设计成100~150bp，最长不超过300bp。不建议设计100bp以下的片段，太难和引物二聚体区分了。4.普通PCR的目的是什么？得到目的片段然后进行克隆，realtime的引物是不行的，片段太短，有时甚至不是开放阅读框，没有酶切位点，没调节阅读框无法正确表达。补充半定量的电泳结果是可以的，可以选realtimePCR对数期最大的循环做普通PCR，电泳，软件分析图像。
赞一下 回复此楼
5楼2013-09-17 19:37:39
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 8 个回答

sageyaya

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+3, 鼓励交流 2013-09-16 14:14:23
是可以的，但是比较麻烦，因为你要通过跑很多次找到一个对数期，如果按照平时的PCR的循环数，很有可能已经过了，已经在平台期了，而且增减很不明显。最好是做荧光定量PCR，方便简单。
另外不加模板的也有带，考虑一下是不是发生污染。
赞一下(1人) 回复此楼
2楼2013-09-16 13:55:50
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

浅笑包包

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by sageyaya at 2013-09-16 13:55:50
是可以的，但是比较麻烦，因为你要通过跑很多次找到一个对数期，如果按照平时的PCR的循环数，很有可能已经过了，已经在平台期了，而且增减很不明显。最好是做荧光定量PCR，方便简单。
另外不加模板的也有带，考虑一 ...

我的意思是我有荧光定量的引物，可以用这个引物来做一般的PCR吗？
赞一下 回复此楼
Be the change you want to see in the world.
3楼2013-09-16 16:56:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

sageyaya

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

引用回帖:
3楼: Originally posted by 浅笑包包 at 2013-09-16 16:56:03
我的意思是我有荧光定量的引物，可以用这个引物来做一般的PCR吗？...

你指的做一般的PCR是要割胶回收，连接什么的么？那是不行的，因为引物只是用来定量的，通常在300bp以内，并不是某个基因的全长，当然，如果的你的基因很短，这个引物已经能够P出来，应该可以吧，
如果是要通过PCR手段来进行定量是可以的。
赞一下 回复此楼
4楼2013-09-17 19:16:28
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 8 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 311求调剂 +4 冬十三 2026-03-24 4/200 2026-03-28 13:17 by 唐沐儿
[考研] 266分，求材料冶金能源化工等调剂 +7 哇呼哼呼哼 2026-03-27 9/450 2026-03-28 12:22 by zllcz
[考研] 学硕274求调剂 +6 Li李鱼 2026-03-26 6/300 2026-03-28 11:16 by Awei099
[考研] 295材料工程专硕求调剂 +6 1428151015 2026-03-27 6/300 2026-03-28 03:51 by fmesaito
[考研] 求调剂 +4 零八# 2026-03-27 4/200 2026-03-27 18:07 by yu221
[考研] 322求调剂 +4 我真的很想学习 2026-03-23 4/200 2026-03-27 13:51 by 杨杨杨紫
[考研] 348求调剂 +4 小懒虫不懒了 2026-03-27 5/250 2026-03-27 12:47 by 果果妈咪
[考研] 085601 材料工程 313分 求调剂 +5 Ong3 2026-03-27 5/250 2026-03-27 12:24 by goldfish51
[硕博家园] 北京林业大学硕导招生广告 +6 kongweilin 2026-03-26 8/400 2026-03-27 10:18 by FF_16
[考研] 324求调剂 +8 hanamiko 2026-03-26 10/500 2026-03-27 08:06 by hypershenger
[考研] 317求调剂 +7 蛋黄咸肉粽 2026-03-26 7/350 2026-03-27 02:29 by fmesaito
[考研] 343求调剂 +4 赠我一本书 2026-03-23 4/200 2026-03-27 00:40 by wxiongid
[考研] 341求调剂 +7 青柠檬1 2026-03-26 7/350 2026-03-27 00:19 by wxiongid
[考研] 325求调剂 +3 Aoyijiang 2026-03-23 3/150 2026-03-26 20:46 by 不吃魚的貓
[考研] 化学工程085602 305分求调剂 +17 RichLi_ 2026-03-25 17/850 2026-03-26 19:44 by plmuchong
[考研] 340求调剂 +3 Amber00 2026-03-26 3/150 2026-03-26 18:57 by 不吃魚的貓
[考研] 309求调剂 +4 gajsj 2026-03-25 5/250 2026-03-26 00:27 by Dyhoer
[考研] 282求调剂 +3 wcq131415 2026-03-24 3/150 2026-03-25 12:16 by userper
[考研] 化工专硕求调剂 +3 question挽风 2026-03-24 3/150 2026-03-24 18:48 by jhhcooi
[考研] 求调剂一志愿海大，0703化学学硕304分，有大创项目，四级已过 +6 幸运哩哩 2026-03-22 10/500 2026-03-22 20:10 by edmund7
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭