| 查看: 1885 | 回复: 4 | ||
bingdong05银虫 (正式写手)
|
[求助]
over-lap PCR 定点突变 已有1人参与
|
|
| 最近在做点突变，利用的是over-lap PCR法，有个问题请教各位虫友哈：前两次pcr产物回收后，第三轮pcr时该如何去做呢？退火温度如何设定呢？是1）先不加上下游引物，让前两次pcr产物混合后，互为模板进行pcr，几个循环后再加入引物（若这样的话，退火温度如何设定呢，几个循环后再加上下游引物，退火温度还需重新设定吗？），还是2）开始就将引物加进去，进行pcr（这样退火温度如何设定呢）？还望虫友们不吝赐教哈！ |
回复此楼» 猜你喜欢
筑牢营养安全线：以精准检测，护健康基石
已经有0人回复
-
推荐一些20种氨基酸检测的实际应用案例
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有72人回复
-
不合理蛙科研实验中的趣事：实验器材的 “乌龙”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验中的趣事：和实验材料的 “斗智斗勇”
已经有0人回复
-
蛋白质检测：精准分析，解锁生物分子的密码
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之小鼠实验：严谨设计，解析生命机制的重要载体
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之重金属检测：精准筛查，守护健康与环境的防线
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“蛙测重金属我背锅三千”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“鼠逃三次我发三篇SCI”
已经有0人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 如何做2个定点突变（2个终止密码子换掉）
已经有12人回复
- 关于定点突变中，突变氨基酸的选择原则
已经有8人回复
- 我想做3个基因的overlap pcr ，不知怎样做才好
已经有7人回复
- PCR 点突变 测序
已经有3人回复
- 单个碱基突变的PCR条件如何优化
已经有11人回复
- 求关于Overlap PCR(重叠延伸PCR)的具体实验过程及原理
已经有10人回复
- 亲们，你们做定点突变么？
已经有31人回复
- 请问RT-PCR的过程会产生插入、缺失、突变等情况吗？
已经有7人回复
- 进行点突变的pcr，不能扩增出产物
已经有3人回复
- 定点突变PCR 用DpnI法
已经有10人回复
- 求助重叠延伸pcr
已经有5人回复
- 在hypermesh里如何实现两个体的 overlap（ansys的命令--重叠部分变为一个新体）
已经有4人回复
- OVER-LAP PCR第二轮扩增不出来条带
已经有6人回复
- 点突变，自己设计互补的突变引物做PCR，这个PCR产物是怎么鉴定？是线性的还是环状的？
已经有6人回复
- overlap PCR之问题
已经有16人回复
- overlap PCR做不出来呐。。。。
已经有23人回复
- 做过overlap PCR的虫子过来看看
已经有19人回复
- A noob intersted in SCI searching for help(about overlap PCR)
已经有4人回复
- Overlap matrix数值小于零
已经有18人回复
- GAUSSIAN怎么计算overlap matrix？
已经有31人回复
- 工程施工中的Platforms overlap怎么翻译
已经有3人回复
- 【求助/交流】定点突变-DpnI消化
已经有12人回复
- 【求助/交流】定点突变PCR后加DPN1酶的作用
已经有4人回复
3楼2013-09-06 14:34:01
clcl88
银虫 (小有名气)
- 应助: 3 (幼儿园)
- 金币: 464.6
- 散金: 1
- 帖子: 140
- 在线: 307.2小时
- 虫号: 2551375
- 注册: 2013-07-18
- 性别: MM
- 专业: 植物生理与生化
2楼2013-09-06 14:17:59
【答案】应助回帖
| 据 丁香通（网址：https://www.biomart.cn/experiment/457/741/43972.htm），“第三步目前很多人的做法都不同，有的人是先加入模板A，B，dNTP，Buffer，水，然后进行3－5个循环的扩增，然后在加入引物A1和B2以及 TAQ酶，这样做的好处是可以得到特异的扩增，缺点是麻烦。另外一种方法是将引物，双模板，酶，dntp等所有的反应成分均一起加入PCR管，进行反应， 好处是节省时间，不太麻烦。” |
4楼2020-12-07 10:25:09
5楼2020-12-07 11:16:46