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风吹我已散

木虫 (正式写手)

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[交流] 试剂盒提质粒？？？？

最近用QIGEN试剂盒提大肠杆菌中的质粒，提出来浓度好低啊，才80ng/u；自己又用手提法提，结果很好。但是粗提的质粒用来转化肯定不好。用试剂盒提了3次了，浓度都很低啊，到底是什么问题呢？

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1楼 2013-09-04 20:34:16

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ykluuniu

金虫 (小有名气)

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引用回帖:

5楼: Originally posted by 风吹我已散 at 2013-09-05 08:47:57
质粒大小：8K左右；都是按试剂盒上的步骤啊：
1. 50ml过夜菌液离心5000rpm 10分钟
2. 将沉淀重悬于4ml Buffer P1
3. 加4ml Buffer P2，上下颠倒4~6次，在室温静置5min
4.加在4度冰箱放置的Buffer P3，轻轻混 ...

这个盒子我没有用过，我做质粒中提用的是OMEGA的盒子。不过，对比之下，你的这个盒子很麻烦，为什么过柱子后还需要自己异丙醇沉降？另外，我提gDNA是用无水乙醇沉降的，不知道质粒为什么用异丙醇。
不过，好像并没有帮到你，不好意思啊

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]