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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 试剂盒提质粒？？？？
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风吹我已散

木虫 (正式写手)

[交流] 试剂盒提质粒？？？？

最近用QIGEN试剂盒提大肠杆菌中的质粒，提出来浓度好低啊，才80ng/u；自己又用手提法提，结果很好。但是粗提的质粒用来转化肯定不好。用试剂盒提了3次了，浓度都很低啊，到底是什么问题呢？
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1楼 2013-09-04 20:34:16
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ykluuniu

金虫 (小有名气)
★
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引用回帖:
5楼: Originally posted by 风吹我已散 at 2013-09-05 08:47:57
质粒大小：8K左右；都是按试剂盒上的步骤啊：
1. 50ml过夜菌液离心5000rpm 10分钟
2. 将沉淀重悬于4ml Buffer P1
3. 加4ml Buffer P2， 上下颠倒4~6次，在室温静置5min
4.加在4度冰箱放置的Buffer P3， 轻轻混 ...

这个盒子我没有用过，我做质粒中提用的是OMEGA的盒子。不过，对比之下，你的这个盒子很麻烦，为什么过柱子后还需要自己异丙醇沉降？另外，我提gDNA是用无水乙醇沉降的，不知道质粒为什么用异丙醇。
不过，好像并没有帮到你，不好意思啊

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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10楼2013-09-05 18:38:05
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ykluuniu

金虫 (小有名气)
★ ★ ★
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风吹我已散: 金币+2 2013-09-05 08:48:06
除了操作手法不行之外，应该没别的问题。能否详细说说你操作的具体过程？

[ 发自小木虫客户端 ]
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2楼2013-09-04 23:32:15
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piaoyunokok

木虫 (正式写手)
★
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最后一步的时候躲在小柱上吸附一段时间
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3楼2013-09-04 23:34:48
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忽而今秋

铜虫 (初入文坛)
★ ★
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风吹我已散: 金币+1 2013-09-05 08:25:00
我们用的axgen还不错。有可能产品批次的问题。溶解的时候加水多溶解会儿。

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4楼2013-09-05 00:10:24
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