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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 氯霉素抗性的质粒转入氯霉素抗性的宿主菌，请问如何鉴定是否成功转入！？
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暖暖暖

铁虫 (小有名气)

[求助] 氯霉素抗性的质粒转入氯霉素抗性的宿主菌，请问如何鉴定是否成功转入！？

如题~氯霉素抗性的质粒转入氯霉素抗性的宿主菌，请问如何鉴定是否成功转入！？
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Only the strong survive.
1楼 2012-05-13 21:25:20
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quiller2000

木虫 (著名写手)
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西瓜: 应助指数-1 2012-05-20 18:34:23
问题是你转进去了，如何确保不丢失呢？
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致良知
2楼2012-05-13 22:18:33
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starseacow

专家顾问 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
没有别的标记了么？摇菌提质粒酶切看看
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植物生理群69993869，为避免广告，申请加入请提供木虫昵称，院校及专业信息
3楼2012-05-13 22:28:02
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陈帅印

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
摇菌扩大培养，先做pcr，再提质粒酶切测序
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4楼2012-05-14 09:47:10
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Rubisco580

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
引用回帖:
2楼: Originally posted by quiller2000 at 2012-05-13 22:18:33:
问题是你转进去了，如何确保不丢失呢？

没错，如何保证呢。
还是换个抗性吧或者换个宿主吧。
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5楼2012-05-14 10:32:14
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xiao7270

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
设计特异性引物做PCR进行验证，提质粒进行酶切验证。为什么不用带别的抗性的质粒？
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6楼2012-05-16 11:33:28
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hyacinth326

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
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小丹木木: 金币+2, 鼓励交流 2012-05-16 16:14:47
你这个菌本身就有抗性的话，很有可能会存在没有选择性压力存在而导致质粒丢失，还有一个方法，你可以先检测一下本身宿主菌抗氯霉素的范围，然后如果是转进质粒的话，应该是能抗更高的抗生素
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7楼2012-05-16 15:24:12
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暖暖暖

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by hyacinth326 at 2012-05-16 15:24:12:
你这个菌本身就有抗性的话，很有可能会存在没有选择性压力存在而导致质粒丢失，还有一个方法，你可以先检测一下本身宿主菌抗氯霉素的范围，然后如果是转进质粒的话，应该是能抗更高的抗生素

谢谢兄台相助，我还是换个宿主菌吧，省得后续出什么问题。
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Only the strong survive.
8楼2012-05-20 10:27:10
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暖暖暖

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by xiao7270 at 2012-05-16 11:33:28:
设计特异性引物做PCR进行验证，提质粒进行酶切验证。为什么不用带别的抗性的质粒？

谢谢相助！这个质粒是分子伴侣的一个质粒，本身带有氯霉素抗性，我之前用一个有氯霉素抗性的宿主菌表达出蛋白了，只是都是包涵体存在，想通过转入这个分子伴侣质粒看看能否提高可溶性的。
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Only the strong survive.
9楼2012-05-20 10:30:17
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暖暖暖

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by quiller2000 at 2012-05-13 22:18:33:
问题是你转进去了，如何确保不丢失呢？

请问一下，为什么会出现丢失的情况啊？我刚开始接触，望指教！
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Only the strong survive.
10楼2012-05-20 10:32:46
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