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暖暖暖

铁虫 (小有名气)

[求助] 氯霉素抗性的质粒转入氯霉素抗性的宿主菌,请问如何鉴定是否成功转入!?

如题~氯霉素抗性的质粒转入氯霉素抗性的宿主菌,请问如何鉴定是否成功转入!?
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Only the strong survive.
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quiller2000

木虫 (著名写手)

感谢参与,应助指数 +1
西瓜: 应助指数-1 2012-05-20 18:34:23
问题是你转进去了,如何确保不丢失呢?
致良知
2楼2012-05-13 22:18:33
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starseacow

专家顾问 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
没有别的标记了么?摇菌提质粒酶切看看
植物生理群69993869,为避免广告,申请加入请提供木虫昵称,院校及专业信息
3楼2012-05-13 22:28:02
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陈帅印

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
摇菌扩大培养,先做pcr,再提质粒酶切测序
4楼2012-05-14 09:47:10
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Rubisco580

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
引用回帖:
2楼: Originally posted by quiller2000 at 2012-05-13 22:18:33:
问题是你转进去了,如何确保不丢失呢?

没错,如何保证呢。
还是换个抗性吧或者换个宿主吧。
5楼2012-05-14 10:32:14
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xiao7270

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
设计特异性引物做PCR进行验证,提质粒进行酶切验证。为什么不用带别的抗性的质粒?
6楼2012-05-16 11:33:28
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hyacinth326

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流 2012-05-16 16:14:47
你这个菌本身就有抗性的话,很有可能会存在没有选择性压力存在而导致质粒丢失,还有一个方法,你可以先检测一下本身宿主菌抗氯霉素的范围,然后如果是转进质粒的话,应该是能抗更高的抗生素
7楼2012-05-16 15:24:12
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暖暖暖

铁虫 (小有名气)

引用回帖:
7楼: Originally posted by hyacinth326 at 2012-05-16 15:24:12:
你这个菌本身就有抗性的话,很有可能会存在没有选择性压力存在而导致质粒丢失,还有一个方法,你可以先检测一下本身宿主菌抗氯霉素的范围,然后如果是转进质粒的话,应该是能抗更高的抗生素

谢谢兄台相助,我还是换个宿主菌吧,省得后续出什么问题。
Only the strong survive.
8楼2012-05-20 10:27:10
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暖暖暖

铁虫 (小有名气)

引用回帖:
6楼: Originally posted by xiao7270 at 2012-05-16 11:33:28:
设计特异性引物做PCR进行验证,提质粒进行酶切验证。为什么不用带别的抗性的质粒?

谢谢相助!这个质粒是分子伴侣的一个质粒,本身带有氯霉素抗性,我之前用一个有氯霉素抗性的宿主菌表达出蛋白了,只是都是包涵体存在,想通过转入这个分子伴侣质粒看看能否提高可溶性的。
Only the strong survive.
9楼2012-05-20 10:30:17
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暖暖暖

铁虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by quiller2000 at 2012-05-13 22:18:33:
问题是你转进去了,如何确保不丢失呢?

请问一下,为什么会出现丢失的情况啊?我刚开始接触,望指教!
Only the strong survive.
10楼2012-05-20 10:32:46
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