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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 氯霉素提高pcDNA3.1(+)质粒拷贝数，可行？
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btx362237729

金虫 (正式写手)

[求助] 氯霉素提高pcDNA3.1(+)质粒拷贝数，可行？

因为做的是DNA疫苗，每只动物要用100ug质粒，浓度要达到1ug/ul

但是目前用试剂盒提取的质粒浓度最大只能达到0.116ug/ul（洗脱50ul），当然这个是没浓缩前的，浓缩还是很随意的。

算了一下，要用掉好多试剂盒呢

请问大家，用氯霉素增加pcDNA3.1(+)的拷贝数可行吗?效果怎么样？pcDNA3.1(+)应该是松弛型质粒。
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人生最黑暗的时光终于过去了
1楼 2012-09-26 11:52:40
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
从你的回收量看，你用的是小量质粒提取试剂盒。而从你的要求来看，你应该使用大规模质粒提取试剂盒。用QIAGEN maxi或者mega。
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2楼2012-09-26 13:30:47
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junminh

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+1, 鼓励交流 2012-09-26 14:40:10
这个是行不通的，只能用试剂盒或者浓缩了，我们用AXYGEN的中/大量试剂盒曾经提到过浓度超过1MG/UL，但是与质粒的烤贝数也有关系的。
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3楼2012-09-26 13:35:24
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jl860822

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
建议使用大抽试剂盒，这个应该可以满足你的需要，用氯霉素提高拷贝数，这个没听过
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4楼2012-09-26 14:18:37
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gwd0312

木虫 (正式写手)

“无冕之王”

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
还没有听说过用某个抗生素可以提高拷贝数的！
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持之以恒、永不放弃！
5楼2012-09-26 16:08:30
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dshlove

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
没听过这种方法啊。
你可以用质粒大提的方法去提质粒啊，反正你要的多，要是需要的话，我有我们自己做的步骤。
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6楼2012-09-26 16:13:49
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btx362237729

金虫 (正式写手)
引用回帖:
5楼: Originally posted by gwd0312 at 2012-09-26 16:08:30
还没有听说过用某个抗生素可以提高拷贝数的！

囧 怎么都没听说过呢，分子克隆上的经典方法啊
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人生最黑暗的时光终于过去了
7楼2012-09-26 20:51:15
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btx362237729

金虫 (正式写手)
引用回帖:
6楼: Originally posted by dshlove at 2012-09-26 16:13:49
没听过这种方法啊。
你可以用质粒大提的方法去提质粒啊，反正你要的多，要是需要的话，我有我们自己做的步骤。

是试剂盒吗？不会是手提吧谢谢回帖
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人生最黑暗的时光终于过去了
8楼2012-09-26 20:52:23
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huiee

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

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P1 P2 P3的方法大量提 简单快速浓度高
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9楼2012-09-27 03:19:24
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

我倒是听说过这个方法。不过从来没有试过，效果怎么样不得而知。我认为就是用大规模制备纯化质粒就行了，也不麻烦啊。
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10楼2012-09-27 07:33:35
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