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btx362237729

金虫 (正式写手)

[求助] 氯霉素提高pcDNA3.1(+)质粒拷贝数,可行?

因为做的是DNA疫苗,每只动物要用100ug质粒,浓度要达到1ug/ul

但是目前用试剂盒提取的质粒浓度最大只能达到0.116ug/ul(洗脱50ul),当然这个是没浓缩前的,浓缩还是很随意的。

算了一下,要用掉好多试剂盒呢

请问大家,用氯霉素增加pcDNA3.1(+)的拷贝数可行吗?效果怎么样?pcDNA3.1(+)应该是松弛型质粒。
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人生最黑暗的时光终于过去了
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

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感谢参与,应助指数 +1
从你的回收量看,你用的是小量质粒提取试剂盒。而从你的要求来看,你应该使用大规模质粒提取试剂盒。用QIAGEN maxi或者mega。
2楼2012-09-26 13:30:47
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junminh

铜虫 (小有名气)

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感谢参与,应助指数 +1
小丹木木: 金币+1, 鼓励交流 2012-09-26 14:40:10
这个是行不通的,只能用试剂盒或者浓缩了,我们用AXYGEN的中/大量试剂盒曾经提到过浓度超过1MG/UL,但是与质粒的烤贝数也有关系的。
3楼2012-09-26 13:35:24
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jl860822

金虫 (正式写手)


【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
建议使用大抽试剂盒,这个应该可以满足你的需要,用氯霉素提高拷贝数,这个没听过
4楼2012-09-26 14:18:37
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gwd0312

木虫 (正式写手)

“无冕之王”

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
还没有听说过用某个抗生素可以提高拷贝数的!
持之以恒、永不放弃!
5楼2012-09-26 16:08:30
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dshlove

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
没听过这种方法啊。
你可以用质粒大提的方法去提质粒啊,反正你要的多,要是需要的话,我有我们自己做的步骤。
6楼2012-09-26 16:13:49
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btx362237729

金虫 (正式写手)

引用回帖:
5楼: Originally posted by gwd0312 at 2012-09-26 16:08:30
还没有听说过用某个抗生素可以提高拷贝数的!

囧 怎么都没听说过呢,分子克隆上的经典方法啊
人生最黑暗的时光终于过去了
7楼2012-09-26 20:51:15
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btx362237729

金虫 (正式写手)

引用回帖:
6楼: Originally posted by dshlove at 2012-09-26 16:13:49
没听过这种方法啊。
你可以用质粒大提的方法去提质粒啊,反正你要的多,要是需要的话,我有我们自己做的步骤。

是试剂盒吗?不会是手提吧谢谢回帖
人生最黑暗的时光终于过去了
8楼2012-09-26 20:52:23
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huiee

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

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P1 P2 P3的方法大量提 简单快速浓度高
9楼2012-09-27 03:19:24
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

我倒是听说过这个方法。不过从来没有试过,效果怎么样不得而知。我认为就是用大规模制备纯化质粒就行了,也不麻烦啊。
10楼2012-09-27 07:33:35
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