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btx362237729

金虫 (正式写手)

[求助] 氯霉素提高pcDNA3.1(+)质粒拷贝数,可行?

因为做的是DNA疫苗,每只动物要用100ug质粒,浓度要达到1ug/ul

但是目前用试剂盒提取的质粒浓度最大只能达到0.116ug/ul(洗脱50ul),当然这个是没浓缩前的,浓缩还是很随意的。

算了一下,要用掉好多试剂盒呢

请问大家,用氯霉素增加pcDNA3.1(+)的拷贝数可行吗?效果怎么样?pcDNA3.1(+)应该是松弛型质粒。
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人生最黑暗的时光终于过去了
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btx362237729

金虫 (正式写手)

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5楼: Originally posted by gwd0312 at 2012-09-26 16:08:30
还没有听说过用某个抗生素可以提高拷贝数的!

囧 怎么都没听说过呢,分子克隆上的经典方法啊
人生最黑暗的时光终于过去了
7楼2012-09-26 20:51:15
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btx362237729

金虫 (正式写手)

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6楼: Originally posted by dshlove at 2012-09-26 16:13:49
没听过这种方法啊。
你可以用质粒大提的方法去提质粒啊,反正你要的多,要是需要的话,我有我们自己做的步骤。

是试剂盒吗?不会是手提吧谢谢回帖
人生最黑暗的时光终于过去了
8楼2012-09-26 20:52:23
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btx362237729

金虫 (正式写手)

送鲜花一朵
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12楼: Originally posted by dshlove at 2012-09-27 08:46:55
有大提的protocol,不是试剂盒,要不?...

方便提供的话当然需要拉非常感谢交流
人生最黑暗的时光终于过去了
14楼2012-09-27 16:07:56
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btx362237729

金虫 (正式写手)

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13楼: Originally posted by Frank王 at 2012-09-27 10:29:02
用中提或者大提,如果你用小题其中有一步可以把几个管合在一起做。浓度会高。

是的。。。于是我把100管混在一起浓缩了,提质粒提到手残啊
人生最黑暗的时光终于过去了
15楼2012-09-27 16:08:33
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btx362237729

金虫 (正式写手)

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11楼: Originally posted by ixido at 2012-09-27 08:40:31
方法可行,但是没试过。

建议用大提或者超大提来做,有国产的试剂盒,也有进口的试剂盒,也可以自己配试剂来做。pCDNA3.1拷贝数还是很高的,一般的大提都可以上0.5ug/ul.

手提大提的话。。。貌似有内毒素啊!!DNA疫苗不能有内毒素的吧
人生最黑暗的时光终于过去了
16楼2012-09-27 16:09:15
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btx362237729

金虫 (正式写手)

送鲜花一朵
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19楼: Originally posted by ixido at 2012-09-28 10:14:04
那就买一个能除内毒素的大提试剂盒,要不就买除内毒素的试剂。除掉后用鲎试剂检测一下。

不可能达到完全没有内毒素的,你平时用的培养基里面都会有内毒素,更可况是质粒这种手工提纯的东西呢。...

谢谢
人生最黑暗的时光终于过去了
20楼2012-09-28 14:18:37
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金虫 (正式写手)

送鲜花一朵
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22楼: Originally posted by wt3532 at 2012-09-28 15:59:13
可以用氯霉素的,自己按照分子克隆上的方法自己配试剂,也不是很贵,比较不常见的试剂就是 SDS 水平衡酚 和 RNA酶了,别的试剂都是常见试剂,用那个大量抽提质粒,而且价格便宜,随便你用多少都可以提。

非常感谢哦!!
人生最黑暗的时光终于过去了
23楼2012-09-28 20:06:50
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