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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 氯霉素提高pcDNA3.1(+)质粒拷贝数，可行？
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btx362237729

金虫 (正式写手)

[求助] 氯霉素提高pcDNA3.1(+)质粒拷贝数，可行？

因为做的是DNA疫苗，每只动物要用100ug质粒，浓度要达到1ug/ul

但是目前用试剂盒提取的质粒浓度最大只能达到0.116ug/ul（洗脱50ul），当然这个是没浓缩前的，浓缩还是很随意的。

算了一下，要用掉好多试剂盒呢

请问大家，用氯霉素增加pcDNA3.1(+)的拷贝数可行吗?效果怎么样？pcDNA3.1(+)应该是松弛型质粒。
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人生最黑暗的时光终于过去了
1楼 2012-09-26 11:52:40
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btx362237729

金虫 (正式写手)
引用回帖:
5楼: Originally posted by gwd0312 at 2012-09-26 16:08:30
还没有听说过用某个抗生素可以提高拷贝数的！

囧 怎么都没听说过呢，分子克隆上的经典方法啊
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人生最黑暗的时光终于过去了
7楼2012-09-26 20:51:15
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btx362237729

金虫 (正式写手)
引用回帖:
6楼: Originally posted by dshlove at 2012-09-26 16:13:49
没听过这种方法啊。
你可以用质粒大提的方法去提质粒啊，反正你要的多，要是需要的话，我有我们自己做的步骤。

是试剂盒吗？不会是手提吧谢谢回帖
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人生最黑暗的时光终于过去了
8楼2012-09-26 20:52:23
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btx362237729

金虫 (正式写手)
送鲜花一朵
引用回帖:
12楼: Originally posted by dshlove at 2012-09-27 08:46:55
有大提的protocol，不是试剂盒，要不？...

方便提供的话当然需要拉非常感谢交流
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人生最黑暗的时光终于过去了
14楼2012-09-27 16:07:56
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btx362237729

金虫 (正式写手)
引用回帖:
13楼: Originally posted by Frank王 at 2012-09-27 10:29:02
用中提或者大提，如果你用小题其中有一步可以把几个管合在一起做。浓度会高。

是的。。。于是我把100管混在一起浓缩了，提质粒提到手残啊
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人生最黑暗的时光终于过去了
15楼2012-09-27 16:08:33
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btx362237729

金虫 (正式写手)
引用回帖:
11楼: Originally posted by ixido at 2012-09-27 08:40:31
方法可行，但是没试过。

建议用大提或者超大提来做，有国产的试剂盒，也有进口的试剂盒，也可以自己配试剂来做。pCDNA3.1拷贝数还是很高的，一般的大提都可以上0.5ug/ul.

手提大提的话。。。貌似有内毒素啊！！DNA疫苗不能有内毒素的吧
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人生最黑暗的时光终于过去了
16楼2012-09-27 16:09:15
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btx362237729

金虫 (正式写手)
送鲜花一朵
引用回帖:
19楼: Originally posted by ixido at 2012-09-28 10:14:04
那就买一个能除内毒素的大提试剂盒，要不就买除内毒素的试剂。除掉后用鲎试剂检测一下。

不可能达到完全没有内毒素的，你平时用的培养基里面都会有内毒素，更可况是质粒这种手工提纯的东西呢。...

谢谢
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人生最黑暗的时光终于过去了
20楼2012-09-28 14:18:37
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btx362237729

金虫 (正式写手)
送鲜花一朵
引用回帖:
22楼: Originally posted by wt3532 at 2012-09-28 15:59:13
可以用氯霉素的，自己按照分子克隆上的方法自己配试剂，也不是很贵，比较不常见的试剂就是 SDS 水平衡酚 和 RNA酶了，别的试剂都是常见试剂，用那个大量抽提质粒，而且价格便宜，随便你用多少都可以提。

非常感谢哦！！
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人生最黑暗的时光终于过去了
23楼2012-09-28 20:06:50
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