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btx362237729

金虫 (正式写手)

[求助] 氯霉素提高pcDNA3.1(+)质粒拷贝数,可行?

因为做的是DNA疫苗,每只动物要用100ug质粒,浓度要达到1ug/ul

但是目前用试剂盒提取的质粒浓度最大只能达到0.116ug/ul(洗脱50ul),当然这个是没浓缩前的,浓缩还是很随意的。

算了一下,要用掉好多试剂盒呢

请问大家,用氯霉素增加pcDNA3.1(+)的拷贝数可行吗?效果怎么样?pcDNA3.1(+)应该是松弛型质粒。
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人生最黑暗的时光终于过去了
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

我倒是听说过这个方法。不过从来没有试过,效果怎么样不得而知。我认为就是用大规模制备纯化质粒就行了,也不麻烦啊。
10楼2012-09-27 07:33:35
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
从你的回收量看,你用的是小量质粒提取试剂盒。而从你的要求来看,你应该使用大规模质粒提取试剂盒。用QIAGEN maxi或者mega。
2楼2012-09-26 13:30:47
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junminh

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
小丹木木: 金币+1, 鼓励交流 2012-09-26 14:40:10
这个是行不通的,只能用试剂盒或者浓缩了,我们用AXYGEN的中/大量试剂盒曾经提到过浓度超过1MG/UL,但是与质粒的烤贝数也有关系的。
3楼2012-09-26 13:35:24
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jl860822

金虫 (正式写手)


【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
建议使用大抽试剂盒,这个应该可以满足你的需要,用氯霉素提高拷贝数,这个没听过
4楼2012-09-26 14:18:37
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