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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » ptet-GFPuv质粒需要加四环素启动吗？
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zxs803

木虫 (小有名气)

[求助] ptet-GFPuv质粒需要加四环素启动吗？

请问对于pTet-GFPuv质粒，启动子为p(LtetO-1)，转化DH5alpha菌株后，要使GFP表达，需要在培养基中加四环素吗？可是宿主菌没有四环素抗性怎么办呢？
还有，哪位同仁做过GFP？如果细菌表达了GFP，那么把菌液滴在紫外投射仪的玻璃板上，在紫外波长下，就能看见绿色荧光吗？
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1楼 2012-06-11 16:03:13
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lihao1988903

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
你的宿主菌是什么抗性的就加什么，只是个筛选作用，你的表达需要诱导剂吗？没做过你这种质粒。另外荧光显色是直接滴在玻璃板上吗？不用电泳？
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2楼2012-06-12 13:01:33
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zxs803

木虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by lihao1988903 at 2012-06-12 13:01:33
你的宿主菌是什么抗性的就加什么，只是个筛选作用，你的表达需要诱导剂吗？没做过你这种质粒。另外荧光显色是直接滴在玻璃板上吗？不用电泳？

启动子是tet-O，我查过文献，没查到关于这个启动子的更详细信息，我不确定这个启动子是否需要加四环素做诱导剂。我疑惑的是，如果培养基加四环素，那宿主也只能选四环素抗性的菌株吗？那这个质粒的应用范围不是很窄吗？
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3楼2012-06-13 10:23:45
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wt3532

木虫 (著名写手)

涛声依旧

【答案】应助回帖

我的理解是这个质粒用的是四环素抗性基因的启动子，后面没有连接抗性基因，没必要加四环素啊，加了可能连细菌都长不出来。
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4楼2012-06-14 21:01:50
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