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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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zxs803

木虫 (小有名气)

[求助] ptet-GFPuv质粒需要加四环素启动吗?

请问对于pTet-GFPuv质粒,启动子为p(LtetO-1),转化DH5alpha菌株后,要使GFP表达,需要在培养基中加四环素吗?可是宿主菌没有四环素抗性怎么办呢?
还有,哪位同仁做过GFP?如果细菌表达了GFP,那么把菌液滴在紫外投射仪的玻璃板上,在紫外波长下,就能看见绿色荧光吗?
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lihao1988903

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
你的宿主菌是什么抗性的就加什么,只是个筛选作用,你的表达需要诱导剂吗?没做过你这种质粒。另外荧光显色是直接滴在玻璃板上吗?不用电泳?
2楼2012-06-12 13:01:33
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zxs803

木虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by lihao1988903 at 2012-06-12 13:01:33
你的宿主菌是什么抗性的就加什么,只是个筛选作用,你的表达需要诱导剂吗?没做过你这种质粒。另外荧光显色是直接滴在玻璃板上吗?不用电泳?

启动子是tet-O,我查过文献,没查到关于这个启动子的更详细信息,我不确定这个启动子是否需要加四环素做诱导剂。我疑惑的是,如果培养基加四环素,那宿主也只能选四环素抗性的菌株吗?那这个质粒的应用范围不是很窄吗?
3楼2012-06-13 10:23:45
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wt3532

木虫 (著名写手)

涛声依旧

【答案】应助回帖

我的理解是这个质粒用的是四环素抗性基因的启动子,后面没有连接抗性基因,没必要加四环素啊,加了可能连细菌都长不出来。
4楼2012-06-14 21:01:50
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