应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 大肠杆菌提质粒遇到问题，请高手帮忙
北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
131/2返回列表12下一页
查看: 2483  |  回复: 12
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

不鸣鸟

木虫 (正式写手)

[求助] 大肠杆菌提质粒遇到问题，请高手帮忙

我用减法提质粒，大量提时各步骤观察没有异常，跑电泳结果如图1：
这是一次提的两管，第一个泳道在操作中失误了，就不说了，第二个泳道是怎么回事，挨着点样空的是蛋白没去干净吗？第二个亮带应该是质粒DNA吧，问题是最下边那个大亮带是怎么回事，是因为碱液裂解的过头把基因组DNA裂解成小片段了吗，这个是整个图片截取得一部分，有maker，最下那条带大小只有100~200bp左右，这是怎么回事，该怎么解决？

我后来又用减法小提，降低2号液碱液浓度跑的电泳图如图二


不知道该怎办，那位高手有提质粒的经验，能不能指点一下，提的时候有哪些是应该注意的，最关键的是怎样避免上面的问题

图一



图二
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2012-08-06 19:51:48
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

虫虫博士

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
自己配置的提取液吧，为什么不买试剂盒？不贵，得到的质粒很纯。
赞一下 回复此楼
2楼2012-08-06 20:16:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

霹雳光

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
是啊，用试剂盒提取的质粒很不错，挺便宜的
赞一下 回复此楼
事实证明，除了你自己，不要指望任何一个人
3楼2012-08-06 20:28:24
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

不鸣鸟

木虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 虫虫博士 at 2012-08-06 20:16:05
自己配置的提取液吧，为什么不买试剂盒？不贵，得到的质粒很纯。

恩，这样提，想量大点，也用试剂盒提了，确实也很省事，我还是想问问碱法大量提的时候这个问题该怎么解决
赞一下 回复此楼
4楼2012-08-06 20:38:07
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

不鸣鸟

木虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 霹雳光 at 2012-08-06 20:28:24
是啊，用试剂盒提取的质粒很不错，挺便宜的

挺着急的大哥，能不能不要过来打酱油
赞一下 回复此楼
5楼2012-08-07 08:19:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

gelois

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
不鸣鸟: 金币+10, 谢谢提醒 2012-08-07 09:25:01
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流 2012-08-07 15:35:55
你这孔里面的应该是蛋白，下面那一大坨应该是RNA。
你裂解液里面加入了足够的RNA酶了么？看起来你的RNA还真不是一般的多啊。
如果你加的菌液多的话，可以适当的再多加些裂解液（加入RNA酶）。
赞一下 回复此楼
6楼2012-08-07 08:40:50
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

gelois

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
小丹木木: 金币+1, 很热心哦 2012-08-07 15:36:14
这里有两份关于质粒提取的常见问题资料，你可以适当的看看，参考参考。
http://good.gd/2169367.htm
http://good.gd/2169373.htm
赞一下 回复此楼
7楼2012-08-07 08:48:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

不鸣鸟

木虫 (正式写手)
引用回帖:
6楼: Originally posted by gelois at 2012-08-07 08:40:50
你这孔里面的应该是蛋白，下面那一大坨应该是RNA。
你裂解液里面加入了足够的RNA酶了么？看起来你的RNA还真不是一般的多啊。
如果你加的菌液多的话，可以适当的再多加些裂解液（加入RNA酶）。

我用RNase消化了啊，37度 三小时，该不会是RNase有问题吧，谢谢啦，我试试
赞一下 回复此楼
8楼2012-08-07 09:24:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

tingspdf

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
有质粒大量提取试剂盒，试试吧，多花点钱迈过去，没必要探讨这个
赞一下 回复此楼
9楼2012-08-07 16:11:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

liuyu_sdili

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
下面一团确实是RNA，建议重新用RNA酶消化~~~~
赞一下 回复此楼
10楼2012-08-07 22:25:58
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 不鸣鸟 的主题更新
131/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 材料0856 英一数二 323 求调剂 +14 袁sy 2026-04-01 14/700 2026-04-05 18:18 by cql1109
[有机交流] 甲醇/二氯 1:15过柱子 5+3 a哎y呦w喂 2026-03-31 3/150 2026-04-05 10:42 by 88817753
[考研] 0703调剂 +11 拾玖壹 2026-04-04 12/600 2026-04-05 10:29 by 果冻大王
[考研] 359求调剂22408 +3 123456789qw 2026-03-31 3/150 2026-04-05 10:09 by zhq0425
[考研] 353求调剂 +10 MayUxw1 2026-04-03 10/500 2026-04-05 09:23 by 无际的草原
[考研] 一志愿北京化工大学，初试成绩350求调剂 +9 沿岸?贝壳 2026-04-04 14/700 2026-04-05 01:09 by 沿岸?贝壳
[考研] 一志愿华北电力大学（北京），材料科学与工程学硕265，求调剂 +11 yelck 2026-04-03 12/600 2026-04-04 19:52 by dongzh2009
[考研] 土木304求调剂 +4 兔突突突， 2026-03-31 4/200 2026-04-04 13:34 by 1753564080
[考研] 考研求调剂 +3 木心想继续深造 2026-04-03 3/150 2026-04-03 21:56 by 啵啵啵0119
[考研] 288求调剂 一志愿哈工大 材料与化工 +39 洛神哥哥 2026-03-31 41/2050 2026-04-03 21:51 by qlm5820
[基金申请] esi高被引论文是不是能对中标有所加分和帮助呢 +5 redcom 2026-04-01 6/300 2026-04-03 15:15 by Howard28
[考研] 土木水利328分求调剂 +6 疾风知劲草666 2026-04-02 6/300 2026-04-03 11:38 by znian
[考研] 279求调剂 +5 傅文秋 2026-04-02 5/250 2026-04-02 18:10 by 笔落锦州
[考研] 求调剂 302分初试 0854 +5 伶可乐 2026-04-02 5/250 2026-04-02 17:53 by 笔落锦州
[考研] 农学考研求调剂 +3 dkdkxm 2026-04-01 3/150 2026-04-02 16:04 by wangjagri
[考研] 一志愿北京科技大学085601材料工程英一数二初试总分335求调剂 +8 双马尾痞老板2 2026-04-02 9/450 2026-04-02 14:45 by 5896
[考研] 一志愿北京科技大学材料学硕328分求调剂 +6 1段时间 2026-03-31 7/350 2026-04-02 13:57 by 3041
[考研] 08开头看过来！！！ +4 wwwwffffff 2026-03-31 6/300 2026-04-02 11:42 by 均值回归
[考研] 求调剂 +4 图鉴212 2026-03-30 5/250 2026-04-01 15:32 by 图鉴212
[考研] 一志愿食品科学与工程083200求调剂 +4 XQTJZ 2026-03-30 4/200 2026-03-31 04:10 by fmesaito
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭