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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 大肠杆菌提质粒遇到问题，请高手帮忙
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不鸣鸟

木虫 (正式写手)

[求助] 大肠杆菌提质粒遇到问题，请高手帮忙

我用减法提质粒，大量提时各步骤观察没有异常，跑电泳结果如图1：
这是一次提的两管，第一个泳道在操作中失误了，就不说了，第二个泳道是怎么回事，挨着点样空的是蛋白没去干净吗？第二个亮带应该是质粒DNA吧，问题是最下边那个大亮带是怎么回事，是因为碱液裂解的过头把基因组DNA裂解成小片段了吗，这个是整个图片截取得一部分，有maker，最下那条带大小只有100~200bp左右，这是怎么回事，该怎么解决？

我后来又用减法小提，降低2号液碱液浓度跑的电泳图如图二


不知道该怎办，那位高手有提质粒的经验，能不能指点一下，提的时候有哪些是应该注意的，最关键的是怎样避免上面的问题

图一



图二
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1楼 2012-08-06 19:51:48
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虫虫博士

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
自己配置的提取液吧，为什么不买试剂盒？不贵，得到的质粒很纯。
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2楼2012-08-06 20:16:05
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霹雳光

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
是啊，用试剂盒提取的质粒很不错，挺便宜的
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事实证明，除了你自己，不要指望任何一个人
3楼2012-08-06 20:28:24
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不鸣鸟

木虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 虫虫博士 at 2012-08-06 20:16:05
自己配置的提取液吧，为什么不买试剂盒？不贵，得到的质粒很纯。

恩，这样提，想量大点，也用试剂盒提了，确实也很省事，我还是想问问碱法大量提的时候这个问题该怎么解决
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4楼2012-08-06 20:38:07
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不鸣鸟

木虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 霹雳光 at 2012-08-06 20:28:24
是啊，用试剂盒提取的质粒很不错，挺便宜的

挺着急的大哥，能不能不要过来打酱油
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5楼2012-08-07 08:19:01
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gelois

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
不鸣鸟: 金币+10, 谢谢提醒 2012-08-07 09:25:01
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流 2012-08-07 15:35:55
你这孔里面的应该是蛋白，下面那一大坨应该是RNA。
你裂解液里面加入了足够的RNA酶了么？看起来你的RNA还真不是一般的多啊。
如果你加的菌液多的话，可以适当的再多加些裂解液（加入RNA酶）。
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6楼2012-08-07 08:40:50
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gelois

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
小丹木木: 金币+1, 很热心哦 2012-08-07 15:36:14
这里有两份关于质粒提取的常见问题资料，你可以适当的看看，参考参考。
http://good.gd/2169367.htm
http://good.gd/2169373.htm
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7楼2012-08-07 08:48:54
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不鸣鸟

木虫 (正式写手)
引用回帖:
6楼: Originally posted by gelois at 2012-08-07 08:40:50
你这孔里面的应该是蛋白，下面那一大坨应该是RNA。
你裂解液里面加入了足够的RNA酶了么？看起来你的RNA还真不是一般的多啊。
如果你加的菌液多的话，可以适当的再多加些裂解液（加入RNA酶）。

我用RNase消化了啊，37度 三小时，该不会是RNase有问题吧，谢谢啦，我试试
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8楼2012-08-07 09:24:26
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tingspdf

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
有质粒大量提取试剂盒，试试吧，多花点钱迈过去，没必要探讨这个
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9楼2012-08-07 16:11:23
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liuyu_sdili

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
下面一团确实是RNA，建议重新用RNA酶消化~~~~
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10楼2012-08-07 22:25:58
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