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不鸣鸟

木虫 (正式写手)

[求助] 大肠杆菌提质粒遇到问题,请高手帮忙

我用减法提质粒,大量提时各步骤观察没有异常,跑电泳结果如图1:
这是一次提的两管,第一个泳道在操作中失误了,就不说了,第二个泳道是怎么回事,挨着点样空的是蛋白没去干净吗?第二个亮带应该是质粒DNA吧,问题是最下边那个大亮带是怎么回事,是因为碱液裂解的过头把基因组DNA裂解成小片段了吗,这个是整个图片截取得一部分,有maker,最下那条带大小只有100~200bp左右,这是怎么回事,该怎么解决?

我后来又用减法小提,降低2号液碱液浓度跑的电泳图如图二


不知道该怎办,那位高手有提质粒的经验,能不能指点一下,提的时候有哪些是应该注意的,最关键的是怎样避免上面的问题

图一



图二
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虫虫博士

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
自己配置的提取液吧,为什么不买试剂盒?不贵,得到的质粒很纯。
2楼2012-08-06 20:16:05
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霹雳光

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
是啊,用试剂盒提取的质粒很不错,挺便宜的
事实证明,除了你自己,不要指望任何一个人
3楼2012-08-06 20:28:24
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不鸣鸟

木虫 (正式写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 虫虫博士 at 2012-08-06 20:16:05
自己配置的提取液吧,为什么不买试剂盒?不贵,得到的质粒很纯。

恩,这样提,想量大点,也用试剂盒提了,确实也很省事,我还是想问问碱法大量提的时候这个问题该怎么解决
4楼2012-08-06 20:38:07
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不鸣鸟

木虫 (正式写手)

引用回帖:
3楼: Originally posted by 霹雳光 at 2012-08-06 20:28:24
是啊,用试剂盒提取的质粒很不错,挺便宜的

挺着急的大哥,能不能不要过来打酱油
5楼2012-08-07 08:19:01
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gelois

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
不鸣鸟: 金币+10, 谢谢提醒 2012-08-07 09:25:01
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流 2012-08-07 15:35:55
你这孔里面的应该是蛋白,下面那一大坨应该是RNA。
你裂解液里面加入了足够的RNA酶了么?看起来你的RNA还真不是一般的多啊。
如果你加的菌液多的话,可以适当的再多加些裂解液(加入RNA酶)。
6楼2012-08-07 08:40:50
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gelois

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


小丹木木: 金币+1, 很热心哦 2012-08-07 15:36:14
这里有两份关于质粒提取的常见问题资料,你可以适当的看看,参考参考。
http://good.gd/2169367.htm
http://good.gd/2169373.htm
7楼2012-08-07 08:48:54
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不鸣鸟

木虫 (正式写手)

引用回帖:
6楼: Originally posted by gelois at 2012-08-07 08:40:50
你这孔里面的应该是蛋白,下面那一大坨应该是RNA。
你裂解液里面加入了足够的RNA酶了么?看起来你的RNA还真不是一般的多啊。
如果你加的菌液多的话,可以适当的再多加些裂解液(加入RNA酶)。

我用RNase消化了啊,37度 三小时,该不会是RNase有问题吧,谢谢啦,我试试
8楼2012-08-07 09:24:26
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tingspdf

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
有质粒大量提取试剂盒,试试吧,多花点钱迈过去,没必要探讨这个
9楼2012-08-07 16:11:23
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liuyu_sdili

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
下面一团确实是RNA,建议重新用RNA酶消化~~~~
10楼2012-08-07 22:25:58
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