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试剂盒提质粒？？？？
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| 最近用QIGEN试剂盒提大肠杆菌中的质粒，提出来浓度好低啊，才80ng/u；自己又用手提法提，结果很好。但是粗提的质粒用来转化肯定不好。用试剂盒提了3次了，浓度都很低啊，到底是什么问题呢？ |
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3楼2013-09-04 23:34:48
2楼2013-09-04 23:32:15
4楼2013-09-05 00:10:24
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质粒大小：8K左右；都是按试剂盒上的步骤啊： 1. 50ml过夜菌液离心5000rpm 10分钟 2. 将沉淀重悬于4ml Buffer P1 3. 加4ml Buffer P2， 上下颠倒4~6次，在室温静置5min 4.加在4度冰箱放置的Buffer P3， 轻轻混匀至蓝色变为白色，于冰上静置15min 5.12000 rpm, 4度下离心30min 6.QIAGEN-tip 平衡， 加4ml BufferQBT 7.吸取步骤5中的上清于BufferQBT中吸附 8.用10ml 的BufferQC 冲洗QIAGEN-tip柱子两遍（2*10ml) 9.取一只新的管子，用5ml BufferQF冲洗柱子 10.在管中加入3.5ml 的异丙醇来沉淀DNA,混匀后分装成几个小管（约6个1.5ml），4度放 置 30min，之后4度下离心20min,轻轻倒掉液体。 11. 用75%的乙醇（2ml)冲洗DNA, 轻轻上下颠倒，12000 rpm 离心10min，轻轻倒掉液体。 12. 在室温下静置5-10min,用dd水溶解DNA. 在10步之后应该看到有白色的DNA啊，可是我的看不到。 |
5楼2013-09-05 08:47:57
